中国兽医药品监察所OIE猪瘟参考实验室：猪瘟诊断技术

    中国兽医药品监察所国家猪瘟参考实验室是由农业部2002年公布的第一批国家参考实验室，2017年6月1日，世界动物卫生组织（OIE）确认中国兽医药品监察所猪瘟实验室成为新的OIE猪瘟参考实验室，该实验室是国内最早开展猪瘟（Classical Swine Fever,CSF）研究的权威实验室之一。

    猪瘟诊断技术

    准确、特异和快速的实验室诊断技术是猪瘟防控的重要手段，病原学检测技术方面，我国OIE猪瘟参考实验室采用自主研发的CSFV E2单克隆抗体优化和完善了CSFV分离培养技术、荧光抗体检测技术、免疫过氧化物酶检测技术和体外病毒中和试验；研制了CSFV通用荧光RT-PCR诊断试剂盒、CSFV MGB鉴别荧光RT-PCR诊断试剂盒和CSFV套式RT-nPCR诊断试剂盒3种CSFV核酸诊断试剂盒，用于CSF疫情监测、强弱毒鉴别诊断、分子流行病学调查；

    研制了猪瘟兔化弱毒疫苗和牛病毒性腹泻病毒检测试剂盒，用于疫苗中间产品效力检验的动物实验替代方法及原材料中牛病毒性腹泻病毒的检测，为疫苗质量安全提供技术保障；还研发了CSFV QuantiGene ViewRNA原位杂交检测方法，可用于CSFV RNA在易感细胞中的复制规律进行研究和临床诊断。

    所有病毒核酸诊断试剂盒的敏感性均高于商品化的国外ELISA抗原检测试剂盒，特异性好。只要根据CSF的临床特征，合理地采用适当的方法，完全可以通过实验室诊断达到确诊CSF的目的。

    在我国，通过抗体水平的监测来制定合理、有效的免疫程序是提高群体免疫水平的保证，也是评价疫苗免疫效果的重要技术手段。OIE猪瘟参考实验室采用杆状病毒表达的CSFV E2蛋白原创性研发的CSFV间接ELISA抗体检测试剂盒，较国外产品具有更高的敏感性、适用性和实用性，解决了长期使用国外同类产品费用高昂的困境，更合适中国目前全面普免的抗体普查，是我国第一个获得新兽药证书的猪瘟抗体检测ELISA制品；

    采用E2蛋白和自制的CSFV E2单克隆抗体原创性地研发了CSFV阻断ELISA抗体检测试剂盒，解决了CSFV间接ELISA抗体检测试剂盒特异性较差的问题，同时敏感性高于同类产品；随着科学技术的发展，将灵敏的化学发光分析技术结合竞争ELISA原理，建立了猪瘟病毒化学发光抗体检测试剂盒，进一步提升了猪瘟病毒ELISA技术的敏感性和特异性。

    采用上述E2单抗完善了OIE推荐的方法：猪瘟病毒荧光抗体病毒中和试验（Neutralization-immunofluorescence，NIF）和猪瘟病毒过氧化物酶联中和试验（Neutralization peroxidase-linked antibody，NPLA）。

    目前，我国OIE猪瘟参考实验室不但建立、完善、使用并推广OIE手册确认的猪瘟诊断技术，还自主研发了一系列的猪瘟新型诊断技术。建立了病毒标准库、血清标准库和单抗标准品库，发布了2项国家标准，并制定了系统的实验室诊断标准操作程序（SOP）。

    2009年至2016年，我实验室6次参加了OIE/欧盟CSF参考实验室（EUCSFRL）组织的来自42个国家50个实验室的CSF诊断能力比对试验（ILCT），达到欧盟标准。实验室已具备OIE要求的诊断能力，人员技术水平和操作技能也达到OIE要求。部分诊断方法被推荐为2011-2017年国家猪瘟免疫和监测方案使用方法。

    至此，我实验室在CSF诊断、疫情监测、分子流行病学分析等所需的检测方法已经系统建立，突破了我国猪瘟诊断试剂长期依赖进口的状态，标志着我国的猪瘟诊断技术达到国际先进水平，提升了中国CSF诊断技术在国际上的认可，为其防控和净化扫清了障碍。

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