该种猪场位于伊犁地区伊宁市的南郊，猪场门前方正对一条公路，交通十分便利，四周为大面积的农田。场主于2007年买下此场，其前身就为猪场，但因经营不善而倒闭。该场现有生产母猪100多头，其中长白条、杜洛克占三分之二，还有几头皮特兰，其余为杂种猪。此场设有5个养殖圈，即育肥猪和育成种猪圈、保育圈、产房、妊娠圈及断奶后的仔猪圈。养殖圈内非工作人员禁止入内，其卫生条件还可以，平常无病时1周消毒1次，发病时1周消毒3次，主要用的消毒液为高锰酸钾、过氧乙酸及一些碱性消毒液。但猪圈通风设备不良，无电风扇，圈内的空气质量较差。产床均为钢丝网床，距离地面20cm左右，其下方为粪坑。平时猪饮用地下水，饲喂正规厂家饲料。死畜一般放入化粪池内，池内的水从墙外的一条小渠流走。场内无专业的兽医人员。一旦发病，工作人员则用青霉素和链霉素进行治疗。

     发病仔猪普遍下痢，粪便为黄色、糊状，精神沉郁，食欲下降，部分发病仔猪体温达40．5～41．0℃，还有部分仔猪于发病次日出现昏睡、盲目运动、倒地、四肢游泳状划动等神经症状，多于1～2d死亡。仔猪的病理变化主要集中在消化道，其空肠、回肠、结肠段黏膜水肿和充血，肠管充满黄色糊状内容物，并伴有鼓气。肠系膜淋巴结肿胀、充血，尸体消瘦、失水。肝脏、脾脏、肺脏及心脏并无异常变化。

     3．1．1试验动物清洁系小白鼠，体重为18g左右，购自新疆医科大学。

     3．1．2主要试剂麦康凯琼脂平板、鲜血培养基、普通琼脂平板、普通肉汤培养基及SS培养基，均由伊犁职业技术学院中心实验室配制;药敏纸片，购自杭州微生物试剂有限公司和北京天坛药物生物技术开发公司;O1～O163抗原标准血清(国药准字为S1082009，批号为20050301)，购自中国生物技术集团公司兰州生物制品研究所。

     3．1．3主要仪器ATB细菌分析仪，购自法国生物梅里埃公司。

     3．2．1病料的采集病料为患大肠杆菌病的仔猪的心脏、肝脏、脾脏、肠内容物及粪便，采自伊宁市南郊的某猪场。

     3．2．2病原的分离及纯化无菌采集病猪的十二指肠内容物及肝脏等组织，接种在普通琼脂平板及普通肉汤培养基中，37℃培养24h，涂片，革兰染色镜检。参照参考文献［1］中的方法挑取表面光滑、边缘整齐、灰白色、半透明的单个小菌落划线接种于麦康凯琼脂平板和鲜血培养基上，于37℃培养24h，观察结果。

     3．2．3染色镜检挑取单个菌落进行革兰染色，在光学显微镜下观察细菌的形态特点。

     3．2．4细菌鉴定1)细菌鉴定前准备。参照法国生物梅里埃公司的ATB细菌分析仪说明书。2)接种物的准备。打开生理盐水基物安剖管(2mL)。取1个大肠杆菌菌落，制备混浊度相当于0．5McFarland的菌悬液，用ATB比浊管测量。3)试验条的接种。取1个大肠杆菌菌落接种到含2mL生理盐水基物安剖管中，混合均匀，并将混合物接到试验条的每支小管内，用ATB微量吸管定量接入55μL/管。用2滴矿物油覆盖鸟氨酸脱羧酶(ODC)、精氨酸双水解酶(ADH)、赖氨酸脱羧酶(LDC)、脲酶(UＲE)、L－阿拉伯糖醇(LAＲL)、半乳糖酸盐(GAT)、5－酮葡萄糖酸(5KG)，试验条盖上盖子，于37℃条件下需氧培养24h。

     3．2．5致病性试验取小白鼠4只，分成2组，2只/组，试验组腹腔注射大肠杆菌增菌培养液，0．3mL/只;对照组腹腔注射生理盐水，0．3mL/只，观察发病情况。取发病与病死小白鼠心血及肝脏、脾脏进行细菌分离鉴定。

     3．2．6血清学鉴定参照参考文献［2－3］中的方法进行血清学鉴定。将待检菌株接种于营养斜面上，于37℃培养24h，用无菌生理盐水制成浓菌液，然后进行玻片凝集试验以确定O血清型。

     3．2．7药敏试验分别从麦康凯琼脂平板、普通琼脂平板、鲜血培养基中挑取大肠杆菌菌落接种到普通肉汤培养基中，于37℃培养24h后分别取少量菌液接种在3个普通琼脂平板上。在1号普通琼脂平板中按顺序依次接入丙氟派酸、羧苄青霉素、氯霉素、痢特灵、庆大霉素、呱拉西林和克林霉素，在2号普通琼脂平板中按顺序依次接入卡那霉素、阿莫西林、氨苄西林、氟派酸、头孢噻吩、罗红霉素、磺胺甲基异唑和奥格门丁，在3号普通琼脂平板中按顺序依次接入阿奇霉素、奥复星、磺胺异唑、强力霉素、培氟沙星和阿米卡星。放好药敏纸片后于37℃恒温培养24h，观察并记录结果，以抑菌圈直径大小进行强度判断:≥7～＜10mm为低度敏感，≥10～＜15mm为中度敏感，≥16mm为高度敏感。

     经24h培养后，试管内液体混浊，试管上部长有菌膜，管底有白色沉淀。

     取少量菌液进行革兰染色，涂片镜检可见大量散在或成对的、无芽孢、两端钝圆的直杆菌，以及着色阴性和少量革兰阳性球菌、双球菌。肝脏触片检查发现，大量的被疑为腐败梭菌的革兰阳性长杆菌，增菌培养后未检出。

     取少量菌液划线接种于普通琼脂平板上，培养后可见边缘整齐、光滑、湿润、中央突起、呈乳白色中等偏大的菌落;但菌落底部有一层菌膜，疑为变形杆菌搀杂所致。

     为了排除变形杆菌的影响，挑取疑似菌落划线接种于麦康凯琼脂平板上，于37℃培养24h后可见圆整、表面凸起、红色的湿润菌落。

     另取疑似菌落分别划线接种于SS培养基和鲜血培养基中，结果在SS培养基上生长贫瘠，呈红色;在鲜血培养基上呈β溶血。

     加入1滴James试剂，应用ATB细菌分析仪进行鉴定，阅读器自动记录培养基测定小管的颜色反应，并根据生化反应表记录结果。生化反应显示:ODC(+)、ADH(–)、LDC(+)、UＲE(－)、LAＲL(－)、GAT(+)、5KG(－)、LIP(－)、ＲP(+)、BGLU(－)、MAN(+)、MAL(+)、IND(－)、BNAG(－)、BGAL(+)、GLU(+)、SAC(－)、LAＲA(－)、DAＲL(－)、aGLU(－)、aGAL(+)、TＲE(+)、ＲHA(+)、INO(－)、ADO(－)、PLE(－)、BGUＲ(+)、CEL(－)、SOＲ(－)、aMAL(－)、MNT(－)、ASPA(－)。综合生化反应的结果，将样品判定为大肠杆菌。

     用大肠杆菌抗O抗原单价血清对分离菌株进行玻板凝集试验鉴定血清型，结果为O138型。

     试验组小白鼠均在48h内出现神经症状，起初比较兴奋，之后精神沉郁，但未见死亡。解剖小白鼠，取其肺脏组织用鲜血培养基培养，结果得到的菌落形态同原菌落，挑取单个菌落进行生化试验符合上述生化反应结果。涂片，镜检，细菌形态也同原细菌。对照组小白鼠均健活。

    

     由表1可知:该菌株对痢特灵、庆大霉素、阿奇霉素、头孢噻吩及奥格门丁具有高敏感性;对强力霉素及磺胺类药物具有中度敏感性;而对羧苄青霉素等已经产生了耐药性。

     1)选用对此菌株高敏感性的药物对仔猪进行治疗，肌肉注射痢特灵、阿奇霉素、头孢噻吩及奥格门丁注射液，2次/d。同时补液(10%安钠咖5mL、2．5%维生素B13mL、10%维生素C5mL、1%硫酸阿托品2mL、5%葡萄糖100mL、生理盐水85mL，混合即得)，混合液用前需加温至39℃，每头仔猪每日腹腔注射5mL。

     2)对腹泻症状较轻的仔猪，用0．1%亚硒酸钠、0．05%痢菌净和0．1%高锰酸钾溶液以1∶1∶1比例混合饮用，1～2d即可治愈。

     3)称取氯化钠3．5g、碳酸氢钠2．5g、氯化钾1．5g、葡萄糖20g、氟哌酸散4g，加温水1000mL溶解，每日早晚各灌服1次，每次80～100mL，也可起到一定作用。

     1)该种猪场仔猪发病的大部分原因是饲养管理不当。圈舍内通风不良，应安装大功率的电风扇来保持圈舍内空气干燥，温度适宜。此外，由于死畜的处理不当造成地下水被污染，猪的饮用水一定要消毒，否则易引起仔猪发病。

     2)猪场内的工作人员要经过严格的培训，无行医资格的人员不能随意治疗病畜。不可长期使用一种药物，该场用药比较单一，并且大剂量使用青霉素、链霉素，造成了耐药性。药物应用应遵循以下原则:选择敏感性强的药物，要早用药、药量足、疗程短;制订完整的猪群药物保健计划，仔猪在出现断奶、转群或者其他应激时，除在饲料中添加抗菌药物外，还应加入多种维生素、微量元素等。在生产过程中，猪场应对药物进行药效观察和筛选，选择性地对母猪进行投药。种母猪产前、产后各喂1周，种公猪每月喂1周。

     3)试验小白鼠没有死亡可能是由于致病性O138抗原显弱阳性，毒力不强，或是由于O1～O163抗原标准血清存放时间过长所致。

     4)国内外对预防仔猪大肠杆菌病的各种类型疫苗研究取得了一定进展，血清型鉴定结果显示，大肠杆菌多致病血清型的存在给防制工作增加了难度。而优势血清型的确定，可用相应血清型制备疫苗，并为最大限度地控制该病提供了条件。因此，定期对猪场的大肠杆菌进行分离鉴定，选用具有针对性的菌株作为抗原制备菌苗，配以敏感药物治疗和良好的卫生措施，才能收到较好效果。

(伊犁职业技术学院，王传锋，胡常红，比尔来西肯)