基因缺失疫苗的兽医领域应用
顾江萍 上海交通大学
基因缺失疫苗通过人为的使病毒某一基因完全缺失或发生突变从而使毒力减弱，感染宿主只能诱发保护性免疫力而不会引起疾病的发生。Ballesteros等畜牧研究人员尝试改变TGEV的S基因214位和655位2个碱基，制成重组疫苗，进行呼吸道和肠道组织感染，证明仅改变655位碱基，就可对呼吸道TGEV产生特异性反应，而219位碱基的改变则导致TGEV肠嗜性的丢失。证明S基因决定病毒对组织的亲嗜性。进一步的研究发现，S基因219位碱基附近存在TGEV受体结合部位。S.Riffault等研究发现缺失S基因的TGEV能够诱导干扰素(IFN)分泌，由于其缺失S基因，因此不产生任何毒性，这为研制TGEV基因缺失疫苗奠定了一定的基础。
近几年，在病毒感染性克隆构建成功的基础上，疫苗研究不再局限于利用免疫原性基因来构建基因疫苗,出现了感染性克隆新型疫苗。其通过构建病毒全长cDNA，利用体外转录系统得到感染性转录本,然后用其转染易感细胞系或动物体，得到感染性病毒粒子(又称感染性克隆),再利用基因缺失、突变、嵌合等反向遗传技术将这种感染性病毒致弱,解除其对宿主细胞蛋白表达系统的抑制作用,但保留了野毒的免疫原性及其正常的增殖能力。与以往的基因疫苗相比，感染性克隆基因疫苗既继承了基因疫苗的优点,又克服了基因疫苗表达量低的缺憾。因为理论上基因疫苗可以源源不断的高水平表达免疫原,事实上目前的基因疫苗很难达到预期的表达水平,其关键在于外源基因能真正进入细胞或细胞核的量很少。感染性克隆疫苗则不然,因为它是作为一种毒力减弱的活毒进入机体内的,具有正常的生活周期,却又没有致病性或致病力很弱,所以它在体内的表达量要远远高于以往的基因疫苗。我国开展反向遗传学的研究与国外相比较晚，所取得的结论性成果也甚少。现在国内研究较多的是口蹄疫感染性克隆疫苗，但尚无TGEV相关报道。
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