重组活载体疫苗对猪传染性肠胃炎的应用
顾江萍 上海交通大学
重组活载体疫苗是用基因工程技术将病毒(常为疫苗弱毒株)构建成一个载体，把外源基因(包括重组多肽、肽链抗原位点等)插入其中使之表达的活疫苗。兽医使用该类疫苗免疫动物时，其向宿主免疫系统提交免疫原性蛋白的方式与自然感染时的真实情况很接近，可诱导产生广泛的免疫，它具有活疫苗的免疫效力高、成本低及灭活疫苗的安全性好等优点。因此用活载体表达TGEV的相关研究较多，疫苗取得了不错的效果。但是在临床试验中发现，减毒微生物可能会引起免疫抑制，建立潜伏感染，同时存在毒力恢复和外源基因表达不稳定等缺点。而无毒的微生物则存在免疫原性差，难以激起机体有效免疫保护的问题。因而，解决载体的安全性、免疫原性是建立有效重组活载体疫苗的关键。
1.乳酸杆菌载体
乳酸杆菌易培养，遗传操作方法成熟、简便、效率高，并且重复性好。口服的乳酸杆菌安全性高，可将特异性抗原分子携带至肠道，穿过肠壁进入粘膜下层，进而引起细胞免疫和体液免疫，对机体有极强的黏附作用，乳酸菌表达的具有治疗或免疫作用的蛋白可以源源不断地在黏膜处产生，持续向机体释放抗原蛋白，有效引起机体的免疫应答和免疫耐受，是一种极具广阔应用前景的疫苗载体。近年来，乳酸菌表达载体系统的研究已显示出优越性。
P.S.Ho等将TGEV的S基因克隆到乳酸杆菌，大肠杆菌穿梭载体中，将表达分泌S蛋白的乳酸杆菌经口免疫BALB／c小鼠，可诱导小鼠产生局部粘膜免疫和全身免疫应答，32d后在小鼠血清中检测到IgG含量为(8.38±0.19)ng／mL，肠道中IgG含量为(64.82±2.9)ng／mL，说明该疫苗可有效预防TGEV感染。唐丽杰等以乳酸乳球菌为载体表达了TGEV的S基因片段，口服免疫BALB／c小鼠，能够产生明显的sIgA抗体。
2.DNA载体疫苗
DNA疫苗即把一个或几个抗原蛋白的编码基因克隆到真核表达载体上，将此重组质粒转入机体内，使编码基因借助宿主的转录和翻译机制获得表达，进而激活机体的细胞和体液免疫应答。DNA疫苗的结构十分简单，它主要由大肠埃希菌来源的质粒组成，没有感染性，只编码目的蛋白质而不包含其它病毒或细菌蛋白质。
KristopHerM等用绿色荧光蛋白替换TGEV基因组ORF3a，构建成TGEV-GFP重组体转染BHK细胞后，能够分离到有效表达绿色荧光蛋白的TGEV-GFP重组体。任晓峰等应用pCI新型真核融合表达载体分别表达TGEVTH298株的全长S基因和主要抗原位点(A、C、D)片段，构建了含有TGEV全长S基因及其主要抗原位点区的核酸疫苗，将重组疫苗免疫小鼠后发现后者的免疫效果优于重组前。
杨恒等将TGEVSC-H株S基因5’端主要抗原位点片段和N基因，插入pMD19-T载体，经酶切与测序鉴定后，构建重组质粒。从T载体上将S、N基因切下，以亚克隆方法插入真核表达载体pVAX1，构建嵌合表达S、N基因的重组质粒pVAX-S-N。以脂质体转染法转染COS7细胞，间接免疫荧光检测转染后细胞外源基因的表达情况。结果表明，重组质粒构建正确且在COS7细胞中得到表达。真核表达质粒pVAX-S-N的成功构建为进一步研究TGEV核酸疫苗奠定了物质基础。
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