重组亚单位串联苗的研究及展望
张静 上海交通大学
基因工程亚单位疫苗由于只含有病原体的一种或几种产生保护性免疫应答所必需的免疫原成分，接种动物后原则上都可使之获得抗体从而具有抵抗病原体感染的能力。因此，在理论上，兽医可将编码高度危险和致病的病原体的免疫原性蛋白质的基因转移到无致病且无害的微生物中，扩大疫苗控制疫病的使用范围。此外，基因工程亚单位疫苗不含有感染性组分，无须灭活，无致病性，且易于大规模生产，成本低廉，使用安全方便。
由于目前SS2的致病机理尚未清楚、对其致病因子也不能完全确定、且抗原类型复杂，阻碍了SS2亚单位疫苗研制的顺利进行，因此鉴定和分离该病原菌关键的免疫原和毒力因子是研究SS2亚单位疫苗的前提和基础。近些年来，随着分子生物学的快速发展，特别是SS2的全基因序列的测序工作完成，使得人们从分子水平理清了该菌的基因组结构，尤其是与致病性有关的基因，为最终揭示其发病和免疫的分子机理，开展针对SS2感染的传统疫苗的改进和新疫苗的研究，提供了坚实的基础。
2005 年李明等将 SS2 MRP 和 EF 串联表达，融合蛋白对新西兰兔的免疫保护率为 50%（2/4），明显高于单个蛋白对照组。2006 年范红结采用 PCR 技术，克隆了马链球菌兽疫亚种的类 M 蛋白基因 szp 片段和 mrp 基因片段，并进行了基因融合和表达，动物试验表明，重组蛋白对猪有 60%的免疫保护率，经过优化和添加适当佐剂，其可作为预防猪链球菌 2 型和马链球菌兽疫亚种有效的重组亚单位二联苗。利用 PCR 技术将马链球菌兽疫亚种 ATCC35246 株类 szp 基因583-1063 位碱基和 SS2 HA9801 株 mrp 基因 298-827 位碱基的片段拼接，可表达分子量为 60kDa 的融合蛋白，表达的融合蛋白同时具有类 M 蛋白和 MRP 的抗原性。纯化蛋白免疫两组仔猪，可提供 60%的免疫保护率。2007 年王华等发现大小为 60kDa 的 SS2 溶血素与 38kDa 蛋白基因的串联表达蛋白具有免疫反应活性，可提供 BALB/c 小鼠比单个表达蛋白组高的约 70%的保护率，能够对 SS2强毒株的攻击起到保护作用。
将两个或以上的具有免疫保护作用的抗原蛋白进行串联表达，可能提高其免疫原性，是目前亚单位疫苗的开发主要发展方向。由MRP等与粘附相关的，并具有较好免疫原性的蛋白研究发现，将此类蛋白组合制备而成的基因工程亚单位疫苗可能从根本上即粘附定植阶段去阻断细菌感染。
已有研究证明，猪链球菌2型亚单位疫苗能对相应的疾病产生有效的保护甚至对不同血清型的攻击也有交叉保护作用，但目前仍无商品化的SS2亚单位疫苗。可以预测的是，基因工程亚单位疫苗作为现代分子生物学和分子免疫学的一个主要发展方向，在SS2引发的各种疾病的免疫预防方面将发挥重要的作用，具有广泛的应用前景。
鉴于今后疫苗研究的发展趋势，本研究将继续探求二氢硫辛酰胺脱氢酶的生物活性及功能，并进一步验证串联表达的蛋白GAPDH-MRP-HM6在仔猪上的保护效果，为猪链球菌亚单位疫苗的筛选工作提供参考。
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