猪源益生菌的筛选
王大会 西北农林科技大学
1 猪肠道益生菌的分布
动物胚胎期的肠道是无菌的，从分娩到体外环境的几个小时之内，庞大的微生物群落迅速在肠道中形成。细菌在肠道的定植顺序依次是需氧菌、兼性厌氧菌和专性厌氧菌，其原因主要在于需氧茵和兼性厌氧菌能够消耗周围环境中的氧气，为专性厌氧菌的生存和定植提供条件。所以通常在仔猪出生后 24 h 左右，空肠、回肠、盲肠和直肠内就分别出现并定居了双歧杆菌、大肠杆菌、乳酸杆菌、消化球菌等，到 8~22天时这些细菌成为优势菌。乳酸菌是猪肠道内极为重要的厌氧菌群，无毒、无副作用，担负着猪体重要的生理功能。其中，乳酸杆菌属、双歧杆菌属、肠球菌属与猪体关系最密切，是猪肠道中的优势菌群。在乳酸菌中，乳酸杆菌属与动物关系最密切，它是动物肠道中占优势的菌群之一。乳酸杆菌分布广泛，动物从口腔到直肠始终有该菌存在。双歧杆菌为猪肠道内的正常寄生菌，且在猪的回肠与盲肠中定植较多。肠球菌是肠道中的正常菌群，从动物出生后即在肠道中定居，从十二指肠到结肠，随肠段后移而逐渐增加。
2 益生菌菌种的选择标准
益生菌在保障人畜健康或防治某些疾病方面发挥着越来越重要的作用，筛选不同来源和具有特殊功能的益生菌菌种成为国内外研究的热点。益生菌筛选标准的依据是它所具有的生理和功能特征。
第一有黏附特性。益生菌在肠道内的黏附定植是其发挥生理作用的前提和基础。益生菌进入胃肠道后，首先和肠黏膜表面相接触，并与黏膜表面的黏附素受体结合而发生黏附。这种黏附是益生菌实现其益生功能的第一步。通过竞争性的占位定植，可以在宿主肠黏膜层形成生物屏障，从而阻止病原菌与肠黏膜受体的结合；另外，粘附定植有利于延长益生菌对宿主胃肠道免疫系统和微生态区系平衡的调节的时间，提高其生理作用的效率。所以，评价和筛选益生菌的黏附性能，是衡量益生菌活菌制剂质量优劣的一个重要内容。
第二有存活特性。能耐受胃肠道内环境，在上皮细胞靶点上存活、繁殖并具有代谢活性等，是益生菌发挥益生作用的先决性条件。存活特性可以通过对益生菌对宿主胃肠道中高胆盐、低pH和各种消化液(胃液，胰液)环境的耐受性来体现。
第三有功能性。益生菌在体内能对致病菌起抑制作用或产生抗菌物质，这是益生菌调节胃肠道微生态平衡，使宿主胃肠道保持健康状态，不受病原菌侵袭的原因所在。
第四能增强免疫功能。益生菌可以通过刺激宿主肠道的免疫应答，提高宿主免疫力来维持健康的微生态区系平衡状态。
第五是临床功效性。每一种益生菌都应具有一种或多种益生特性，并能在临床上得到验证，这是益生菌应用价值的体现。
最后，益生菌种还应具备可加工性。能在生产工艺流程中持久的保持活力和生物学功能特性是开发应用益生菌活菌制剂的关键。
3 16S rDNA 序列分析技术在细菌鉴定中的应用
细菌的分类和鉴定经过了漫长的研究阶段。传统上，细菌主要依靠培养和生化等表型特征进行分类鉴定，这就是表型分类法，该方法技术难度低，工作量大，但试验成本较低，是早期研究者首选的细菌鉴定方法。近年来，随着分子生物学发展迅速，特别是PCR技术应用以来，细菌的分类鉴定开始进入分子水平，各种基因型分类方法也应运而生，如(G+ C)mo l%、DNA 杂交、rDNA 指纹图、质粒图谱和16Sr DNA等。其中，16SrDNA序列分析已经成为细菌种属鉴定和分类的标准方法，现在已经报道的16S rDNA 全序列有2500多个种，各种属的系统发育树也已构建，这为大部分细菌的分类鉴定提供了充足的数据。但16S rDNA 序列在原核生物中高度保守， 所以对于相近种或同一种内的不同菌株鉴别分辨力较差。
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