血清学和电镜技术诊断猪输血传播病毒流行病
刘建波 中国农业科学院
兽医利用抗原或抗体检测的体外免疫反应技术建立的诊断方法称为血清学诊断方法。目前已经建立多种血清学诊断方法,其中包括间接免疫荧光试验(Indirect immunofluorescence assay,IIF)、免疫过氧化物酶单层细胞试验(Immunoperoxidase monolayer assay,IPMA)、酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)等。Huang等首次对PTTV2假定ORF1壳体蛋白的氨基末端利用大肠杆菌表达系统进行了截短表达,对该蛋白进行纯化。利用该纯化的蛋白抗原分别建立了Western blot和ELISA方法,用于检测猪血清中PTTV2抗体,用建立了ELISA方法对猪血清中进行了流行病学调查。
免疫电镜技术,即免疫化学技术与电镜技术结合的产物,是在超微结构水平研究和观察抗原、抗体结合定位的一种方法学。它主要分为两大类:一类是免疫凝集电镜技术,即采用抗原抗体凝集反应后,再经负染色直接在电镜下观察;另一类则是免疫电镜定位技术。该项技术是利用带有特殊标记的抗体与相应抗原相结合,在电子显微镜下观察,由于标准物形成一定的电子密度而指示出相应抗原所在的部位。Yukio根据在含有TTV粒子滴度达到108/ml的HIV患者的血清的浮力密度在1.31-1.33 g/ml的部分通过电子显微镜观察到球型病毒样颗粒,直径为30~32 nm。病毒粒子经过富集后,与金标记的抗IgG抗体反应后,通过免疫电镜观察,发现病毒粒子是与IgG抗体结合的方式存在的,并首次观察到人源的TTV形态,但目前关于PTTV形态还没有观察到。
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