猪前脂肪细胞增殖与分化的规律
张平平 广东海洋大学
MTT 法是畜牧研究人员常用的一种检测细胞存活和生长的方法，常用其描绘细胞生长曲线。其检测原理是：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶在外源性 MTT 作用下，还原为不溶性的蓝紫色结晶物甲臜，并沉积在细胞中，而死细胞则无此功能；二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臜，通过酶联免疫检测仪在 490nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定范围内，甲臜结晶物形成的量与细胞数成正比。该方法灵敏度高、经济，已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
细胞生长曲线是观测细胞在一代生存期内的增殖过程的重要指标。离体培养的大多数细胞生长都遵循基本规律——呈现 S 型的增殖趋势。离体培养的细胞在经历贴壁和短暂的生长停滞期后，细胞开始增殖。与此同时，细胞内的遗传信息不断自我复制，并进行有丝分裂，在一段时期内，细胞数量呈指数增长。离体培养细胞并不能无限增殖，当细胞增殖到一定程度，细胞发生汇合，产生接触抑制以及密度抑制。猪前脂肪细胞的离体培养的增殖规律，也同样遵循着这个基本规律。在本实验中，从猪颈部皮下脂肪组织分离出的猪前脂肪细胞在含 10%小牛血清的 DMEM/F12 培养液中体外培养，其生长增殖规律也呈现类似的 S 型生长曲线。与 Van 等所得结论是一致，本实验结果基本符合一般细胞离体培养增殖的规律。并且，细胞体现出的群体倍增为4.73 天，这也与一般细胞离体培养增殖的群体倍增时间相近。
从仔猪脂肪组织中分离猪前脂肪细胞并成功进行离体培养，采用 MTT 法、油红O 染色以及 LPL 活性测定对猪前脂肪细胞形态、增殖与分化规律进行了初步鉴定，结果表明：
（1）原代猪前脂肪细胞增殖呈现 S 型增殖规律，倍增时间为 4.73 天，培养至第7 天形成细胞单层并进入接触抑制状态。
（2）猪前脂肪细胞在离体原代培养第 3 天开始充脂，到第 9 天大量充脂过程中，细胞由梭形逐渐变成圆形，细胞内开始聚集大量小脂滴，随后小脂滴汇聚成大脂滴，细胞体积增大，成为成熟的脂肪细胞。
（3）LPL 活性也随前脂肪细胞的增殖、分化呈现出先升高后下降的变化趋势。
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