猪戊型肝炎病毒诊断表位的筛选
刘启文 上海师范大学
HEV抗原表位多是围绕在ORF1、ORF2和ORF3上，其中大多特异性抗原表位在ORF2中，目前对戊型肝炎病毒的表位研究大多是针对人的。Kaur等在根据ORF1序列设计合成的系列多肽片段中，发现人类线状B细胞抗原表位存在于12个独立的多肽片段。ORF3编码的蛋白主要参与产生急性期血清抗HEV IgG抗体，其抗原表位集中于第91-123aa，具有型特异性，利用不同型ORF3作诊断试剂，不但可以准确检查出戊肝病毒基因型，而且对诊断急性戊肝有意义。
ORF2上抗原表位数量多，结构复杂，大多数分布在C端2/3部分。越来越多的研究表明其C端的2/3部分含有多个具有免疫优势的B细胞表位，包括能诱导免疫保护力的抗原表位（Li F等，1997），因而广泛应用于HEV感染的免疫诊断及疫苗研究。已经定位了在ORF225-38，341-354，517-530，319-340，422-437，631-648，641-660，390-470和546-580aa上有九个抗原决定簇区段，并且在394-470aa之间至少含有5个不同免疫活性的抗原表位。Purdy等在研究大肠杆菌表达的HEV-trpE融合蛋白C2（24-660aa）时，指出ORF2蛋白C端2/3的部分其抗原表位与高级结构有关。Meng等在此基础上首先发现并确定ORF2编码蛋白的C末端452-617aa存在中和抗原表位，Schofield等用黑猩猩抗HEV抗体建立了噬菌体展示库，用两种ORF2重组蛋白抗原对此库进行筛选，确定了中和抗原表位在ORF2的C端。
对猪戊型肝炎病毒诊断表位的筛选的研究，最早是Meng 等利用SF9细胞中表达的人HEV（Sar55）ORF2 重组蛋白作为ELISA 包被抗原来检测HEV抗体，以免疫前和超免疫阳性血清分别作为阴性、阳性对照，并使用阻断ELISA作为确证实验，测出美国中西部猪群HEV 抗体阳性。
Meng等之后进一步用重组人HEV衣壳抗原来检测猪HEV抗体。彭小兵以猪HEV 新疆株swCH25 ORF2（367-671aa）基因工程表达蛋白p305 ORF2 作为包被抗原，以猪HEV 阳性血清作为第一抗体，以HRP 标记的SPA（HRP-SPA）代替酶标抗体作间接ELISA 来检测采自江苏、河南和山东地区的猪血清中的HEV IgG。ET2.1是一个含有主要构象的表位的重组抗原，这个重组抗原可以用间接ELISA方法来检测猪HEV。
另外，利用重组蛋白ET2.1和过氧化物酶标记做成的双抗原夹心法可以用来检测人和猪的总抗体（IgG和IgM）。Zhao等对猪戊型肝炎病毒的诊断表位进行了系统的筛选。我们利用计算机从猪HEV swCH25 毒株 ORF1、ORF2、ORF3的蛋白中识别并合成了12个多肽抗原区。用以上12个合成多肽抗原用猪HEV阳性血清做ELISA试验，筛选出位于ORF3上的swHEV11（91-114）抗原为最佳多肽抗原体，将具有抗原性的多肽包被ELISA板子具有很好的特异性、灵敏度和重复性，说明该多肽表位是猪HEV特异性的抗原表位。
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