粪臭素样品处理方法
刘建华 南昌大学
样品中粪臭素的提取方法有液一液萃取、液一固萃取和超临界萃取等。李家胜等兽医提取脂肪中的粪臭素采用甲醇匀浆过滤再经C18柱除去脂肪，肌肉中的粪臭素经甲醇匀浆过滤提取，而血清样品中的粪臭素采用乙醚提取和乙睛一水溶液两步提取。采用超临界二氧化碳在40℃下萃取20分钟可提取猪背膘中65%左右的粪臭素。郑君杰等将猪背膘中的脂肪热融化后采用正己烷去除脂肪后用乙睛一水溶液提取粪臭素。也有将正己烷和异丙醇混合溶剂与猪背部脂肪匀浆后过滤，滤液直接进行HPLc分析。还有将背部脂肪和甲醇匀浆后过滤提取粪臭素，滤液经超声处理并离心后取上清进行分析。
MRius等将背部脂肪样品和氯仿一甲醇(2:1，V/V)匀浆后室温放置过夜，提取液经无水硫酸钠过滤脱水后进一步用氯化钠饱和水溶液脱水分离含粪臭素的有机相后采用旋转蒸发仪除去有机溶剂，残留物用正己烷一异丙醇溶解后进行HPLc分析。
Kverheyden等将背部脂肪样品和甲醇匀浆后，在液氮中冷冻后离心出去悬浮物，将上层清液再次冷冻并过滤以进一步出去悬浮物后进行液相色谱一质谱分析。M.Dehnhard等将背部脂肪与正己烷匀浆后用乙睛一水(75:25，V/V)进行提取四。M.Dehnhard等用甲醇提取粪臭素并经 AmberlitexAD一8柱纯化后进行HPLC分析。采用丙酮汀ris缓冲液提取背部脂肪中的粪臭素。 MPorte:为从猪背部脂肪中用提取于气相色谱分析的粪臭素，首先用甲醇进行粗提，并后续采用冷冻离心和柱纯化等手段去除残留脂肪卿。
胡彩虹、夏枚生等分析发酵液中粪臭素的含量，将发酵液和2倍体积的甲醇混合后经离心分离后取上清直接进行HPLc分析。李彩燕等在微生物培养液中按照1:2(v瓜)加入甲醇涡旋混匀后冷冻20min加速沉淀，经离心后取上清测定粪臭素的含量网。顾媛采用甲醇提取猪背部脂肪中的粪臭素后经C18柱除去脂肪后用于HPI尤分析，对于肌肉样品用甲醇提取经离心和过滤后用于HP砚分析。代敏等为测定保鲜乳中粪臭素作为风味物质时比较了静态顶空法、固相微萃取和吹扫捕集法后确定采用吹扫捕集法提取挥发性风味物质(含粪臭素)进行Gc一Ms分析。
刘旭辉等对粪便加锯末的微生物固体发酵物用甲醇提取其中的粪臭素后进行HPLC分析。李平等分析培养液中粪臭素及其代谢产物时，发酵液离心后直接将上清液用于HPLC分析，培养液经二氯甲烷提取两次后进行气相色谱一质谱分析。样品中粪臭素的提取方法多基于粪臭素具强的亲脂性而建立，采用有机溶剂提取粪臭素，对于含脂肪较多的样本可后续采用柱纯化或者冷冻离心的方法进一步除去脂肪，对于含脂肪较少的样本提取后可以直接测定。
在样品处理方法选择时通常需要考虑以下三方面的因素:(1)样品本身的特点。如脂肪含量、粪臭素含量、其他小分子有机物的存在。(2)分析方法的需求。粪臭素常用的分析方法是采用HPLC结合紫外或者荧光检测器分析。紫外检测的灵敏度稍低，低含量干扰组分的影响不明显，荧光检测灵敏度高，样品溶液纯度影响较大。另外如样品溶液中干扰组分太多对于HPI刀分析时流动相和洗脱方式的选择也会带来影响。(3)有机溶剂的选择。单一溶剂或者混合溶剂都需要考虑溶剂的极性既满足将样品中的粪臭素提取完全，同时要减少其他极性或者性质相近物质的带入，考虑提取完成后有机溶解的挥发去除等问题。并且还要求提取方法有好的回收率和重复性。
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