土壤中猪细小病毒检测方法的建立及应用
涂攀 华中农业大学
猪细小病毒病是由猪细小病毒引起的以初产母猪发生流产、不孕、产死胎、畸形胎、木乃伊胎等为特征的猪的主要繁殖障碍性疾病之一。该病广泛存在于世界各地并在大多数猪场流行，严重地影响着畜牧业的发展，这种病毒在环境中可存活数月之久，且对大多数消毒剂都具有抵抗力。正是因为这个原因，这种病分布非常广泛，且很难根除。
研究利用环介导等温扩增技术和猪细小病毒高保守的VPZ基因设计特异性引物，建立了快速方便的猪细小病毒临床检测方法。可以从土壤样品中检测出0.002个TCIDso。
在LAMP反应体系中，引物浓度、BSA浓度、dNTPs浓度、DNA聚合酶、温度等都影响着PCR反应结果。为此本研究对其重要因素进行了探讨。其中最主要的因素之一是否添加BSA，土壤中微生物的种类多，虽然用基因组试剂盒提取的DNA比传统方法含的杂质少些，但在模板中加了BAS比没有加的更敏感些。BSA的一个可能作用机制是作用于多酚体系，腐殖酸、蛋白质，从土壤提取的DNA中常含有内源的多酚类化合物，它可与相应的蛋白质结合，致使酶失活，影响其结果。而BSA可以通过其上富含赖氨酸的阳离子，它可与多酚化合物的阴离子相互作用，或是通过疏水相互作用力消除内源的多酚类化合物，而起到消除多酚化合物与蛋白质的作用，即阻止它们与酶结合，从而提高酶的活性，以最终对LAMP反应起到改善的作用。
在实验中，我们建立了一个特异性强、敏感性高的检测土壤中猪细小病毒的方法，实验数据证明该方法比建立的PCR方法更敏感;对来自湖北省18个猪场的92份土壤样品，进行土壤基因组的检测，分别用PCR方法和LAMP方法进行检测。LAMP检测出14份(巧.23%)猪细小病毒阳性，而PcR仅检测出10份(10.87%)阳性。
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