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公猪在猪细小病毒的传播中也起着重要作用。McAdarogh和Ahacher等 (1985)应用Hl对786头公猪的PPV抗体检测表明:6月龄以下的公猪其血清学阳性率为48.1%,7一11月龄公猪其血清学阳性率为59.0%,而超过12月龄公猪其血清学阳性率为81.7%,说明随着公猪年龄的增加,公猪感染的机率也会增强。对基层兽医来说是经常会遇见的病毒。
猪细小病毒的常用的检测方法主要包括病毒的分离与鉴定、酶联免疫吸附试验、PCR技术、血凝抑制试验、中和试验、凝胶扩散试验、补体结合试验等。而猪场土壤中检测方法报道的比较少,主要有细菌分离培养法、生理生化鉴定、PCR、Real一PCR、环介导等温扩增技术(LAMP)。细菌分离培养法,生理生化鉴定试验需要很长时间,PCR,Real一PCR比细菌分离培养法和生理生化鉴定试验快,且能检测出土壤中很难培养或不能培养的微生物,但需要较贵的仪器设备,而LAMP技术相对PCR等技术,其特异性强,恒温操作,设备简单。
环介导等温扩增法(Loop一 mediatedisothermalamplifieation,LAMp),是由日本科学家Notomi等于2000年发明的一种体外恒温核酸扩增方法伽 otomietal.,2000)。其特点是利用一种具有链置换活性的DNA聚合酶 (BstDNAPolymerase)在恒温条件下(60℃一65℃)反应30一60min,即可完成核酸的大量扩增,不到111的时间内扩增效率可以达到10的9次方至10次方个数量级。
LAMP反应包括非循环和循环两个阶段。首先是非循环阶段,DNA样品在95℃预变性解链为单链后在链置换DNA聚合酶作用下于65℃左右进行反应,但有些微生物的DNA是单链,所以就不需要 95OC预变性,只需恒温条件就可以完成其反应,其操作简单,迅速。
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