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孙黎 西北农林科技大学
猪圆环病毒相关疾病的诊断必须将临床症状、病理变化和实验室的病原或血清学检测等进行相结合分析才能得到可靠的结论,临床症状只是一个很重要的判断依据而已,还需要大量的实验室检测。
1. 病毒分离鉴定
一般采取患病猪的肺和淋巴组织,无菌处理后,接种于无污染的 PK-15 细胞中,进行电子显微镜观察、PCR 检测及 IFA 确认。Opriessnig 等从患 PMWS 的病猪上分离到 12 株 PCV-2,经过病毒分离,结合血清学检测方法,发现其中 9 株与 PCV-2A型相似性很高,另外 3 株与 PCV-2B 型相似性很高。Morandi 等通过病毒分离与免疫组化检测了患有繁殖障碍和肺坏死而死亡的病猪,检测到了主要的病原有PRRSV 和 PCV-2。虽然病毒分离检测方法是最可靠的检测方法,但是由于其耗费操作时间,还需要与其他的检测方法共同诊断,所有不适于 PCV-2 的快速检测,也不适合临床样品的快速检测需要。
2 血清学与免疫学检测
2.1酶联免疫吸附试验(ELISA)
Yin 等建立了针对 PCV-2 cap 蛋白的间接酶联免疫吸附法(TcELISA),与间接免疫荧光法进行了对比试验发现,其与后者的相符度几乎为 100%。Huang 等建立了对 PCV-2 的单克隆抗体 ELISA 检测方法,其用 PCV-2 的血浆中和抗体同时还做了血清中和试验,对比后发现这个方法更加简化、特异、敏感和方便,是一种非常合适检测 PCV-2 的方法。
2.2免疫组织化学法
Hansen 等对感染的 PCV-2 引起的繁殖障碍性疾病的病猪进行检测,经过对免疫组织化学法(IHC)和定量 PCR 方法的对比表明,单独使用 IHC 方法适合于在病情非常严重时的检测,而定量 PCR 检测感染时间范围更广;试验也表明母猪感染 PCV-2 时,子宫内的 IgG 检测是不可靠的。其同时对 2010 年丹麦患136 个呼吸道疾病综合征的猪和 36 无肺部病变猪的肾脏中 PCV-2 用 IHC 方法进行了检测。
2.3间接荧光抗体试验
车勇良等针对 PCV-2 抗体用 PCV-2-Cap 蛋白建立了间接 ELISA 方法,结果显示,建立的方法有很强的稳定性特异性,对流行病学调查有很大的启示。Patterson 等(2011)在北美用间接荧光抗体试验(IFATs)和 ELISA试剂盒进行了 PCV-2
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