伪狂犬病病毒检测方法

孙黎 西北农林科技大学

 

    伪狂犬病是由伪狂犬病毒引起的一种传染病，上世纪六、七十年代，由于强毒株的出现，该病从之前的发病症状温和、经济损失较小骤变成症状明显加剧、经济损失巨大，在某些地区，伪狂犬病甚至被认为是对经济影响最大的猪病毒病。其对于牛、绵羊、山羊、猫、狗和浣熊等其他家畜和野生哺乳动物来说，都是易感病毒。

 

1. 血清学与免疫学诊断方法

 

1.1 微量血清中和试验（MSN）

    是一种改进的血清中和方法，检出率和病毒分离鉴定相当，虽然此法用起来比较便捷，但是试验本身的耗时较长，不适合大量的样品检测。

 

1.2乳胶凝集试验（LAT）

    LAT 是以乳胶颗粒作为载体的一种间接凝集试验，即吸附可溶性抗原于其表面，特异性抗体与之结合后，可产生凝集反应，本方法降低了检验成本和劳动强度，有较高的特异性，可以在临床中应用于血清筛选或早期感染诊断，具有高效的优点。LAT 已成为新兴的一种免疫性诊断方法，将越来越多的用于病毒诊断中。具有广阔前景和推广价值。 宋春阳等人对山东 7 个猪场共一百多份血清用伪狂犬乳胶凝集诊断试剂盒进行血清学调查，血清阳性率达 25%。

 

    牛春玲等分别应用 LAT、琼脂免疫扩散试验（AGID）、血清中和试验（SN）3 种诊断方法对 45 份猪血清样品进行了 PRV 血清抗体检测，以进口试剂盒 ELISA 诊断方法为标准，对这 3 种血清学检测结果进行了比较分析，结果表明 LAT、AGID 的可重复性均为 100％，SN 的准确性、敏感性、特异性均最为理想，LAT 的敏感性较好，准确性和特异性稍差，AGID 的准确性、敏感性、特异性均较差。宋春阳等（2008）对山东 7 个猪场共 100 多份血清用伪狂犬乳胶凝集诊断试剂盒进行血清学调查，发现血清阳性率达 25%。Corn 等（2010）用 LAT 对疑似 PR 发病猪的粪便进行诊断检测，发现本方法便利性，更具实用性。但 LAT 方法由于不能对样品病毒进行定量而限制了临床应用性。

 

1.3 酶联免疫吸附试验（ELISA）

    在血清学诊断方法中 ELISA 诊断 PRV 的方法越来越成熟，国内外已经出现了商品化的试剂盒，使此方法在 PRV 的检测中已经越来越广。姜艳芬等用 gE-EL ISA 法对陕西省部分猪场的 187 份猪血清进行了 PRV野毒感染检测，结果显示陕西省猪 PRV 野毒抗体平均阳性率为 28.76%，最高为 48.98%。朱凤霞等应用中国农业科学院哈尔滨兽医研究所生产的猪伪狂犬病 DOT-ELISA诊断试剂盒对河南省驻马店市哺乳仔猪病进行诊断。熊英等采集四川眉山一家大型猪场大量死亡的病猪的肝脾脏和淋巴结，通过琼脂扩散试验、ELISA 和细菌培养等方法同时对病料作了血清和细菌培养鉴定检测，确定为 PRV 和沙门氏杆菌混合感染。Serena 和 Maria Soledad 等针对 PRV 的 gE 基因的结构蛋白的免疫优先抗原决定簇设计了 ELISA

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