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2014年 1 月份， 吉林某猪场保育猪群发病， 先后用替米考星、 氟苯尼考、 硫酸卡那霉素、 头孢噻呋、 干扰素、 五联抗体等治疗后效果不佳， 于是带活猪1 头、死猪 2 头来辽宁农业职业技术学院动物诊疗中心就诊。病猪的主要临床症状:猪耳部、 嘴等皮肤发紫， 严重咳喘， 呼吸困难;关节肿大， 体温升高， 明显变瘦。猪场免疫情况:接种过猪瘟疫苗、 伪狂犬病疫苗、 猪蓝耳病疫苗、 猪圆环病毒病疫苗。治疗情况:由于有呼吸道症状， 怀疑是支原体感染， 先后用替米考星、 氟苯尼考、 硫酸卡那霉素进行治疗， 效果甚微;后改用头孢噻呋并配合干扰素治疗， 效果不佳;再后来直接应用五联抗体， 也未取得预期效果。
根据此种情况， 先对病死猪进行病理剖检和实验室诊断， 包括猪瘟、 猪蓝耳病、 猪圆环病毒病的病原检测;分离鉴定心包、 肺脏和肠道细菌， 主要包括副猪嗜血杆菌、 大肠杆菌和沙门杆菌的检测。
1 病理剖检
剖检可见:胸腔、 心包有半透明积液;全身淋巴结肿大、 充血、 淤血;肺脏肿大、 充血、 淤血、 肉样变并伴有气肿;心脏肿大， 心脏冠状脂肪呈胶冻样变， 心腔积有半透明液体;肝脏淤血、 肿大;脾脏边缘有少量出血点， 另一头猪脾脏质地坚实， 有增生;肾脏肿大， 肾乳头充血、 淤血;肠黏膜充血， 结肠黏膜表面有糠麸样乳白色物覆盖， 剥离后见黏膜出血。各脏器的病理变化情况见 271 页彩图 1。
2 实验室诊断
2.1 病原诊断
2.1.1 猪蓝耳病病毒 ＲT － PCＲ 检测结果
取 3 头猪的病料、 血液进行猪蓝耳病病毒的 ＲT － PCＲ 检测。引物序列:上游引物 5' － ATGGCCAGCCAGTCAATCA －3';下游引物 5' － TCGCCTAATTGAATAGGTGA － 3'。PCＲ 反应条件:95 ℃ 15 min;94 ℃ 20 s， 55 ℃ 20 s，72 ℃ 30 s， 共35 个循环;72 ℃ 10 min。取 PCＲ 产物用 1． 5%琼脂糖凝胶检测， 结果见图 2。
由图 2 可知， 全部样品均为猪蓝耳病病毒强阳性。
2.1.2 猪圆环病毒的PCＲ检测结果
取 3 头猪的病料、血液进行猪圆环病毒的PCＲ 检测。以抽提的ＲNA 作为模板， 加入 1． 5 μL 上游引物，混匀，100 ℃煮沸 5 min 后迅速冰浴 5 min;加入 10 × Buffer 2 μL、10 mmol/L dNTP 2 μL、ＲNase 1 μL，混匀，37 ℃保温5 min;加入 M － MuLV 1 μL，混匀，37 ℃保温1 h。引物序列:上游引物 5' － CTCCATGTGCCATGTACAGC －3';下游引物 5' － TCGACGTGAGCAGAAGCCCA － 3'。PCＲ反应条件:94 ℃ 5 min;94 ℃ 60 s，55 ℃ 60 s，72 ℃ 1.5 min，共30 个循环;72 ℃ 8 min。取 PCＲ 产物用 1%琼脂糖凝胶电泳检测， 结果见图 3。
由图 3 可知， 全部样品均为猪圆环病毒强阳性。
2.1.3 猪瘟病毒 ＲT － PCＲ 检测结果
取 3 头猪的病料、 血液进行猪瘟病毒的 ＲT － PCＲ 检测。方法及采用的引物同猪圆环病毒的检测， 结果见图 4。由图 4 可知， 全部样品均为猪瘟病毒阴性。
2.2 细菌检测
2.2.1 副猪嗜血杆菌的检测采用 ELISA 方法检验
由表 1 可知， 副猪嗜血杆菌的检测结果为阴性。
2.2.2 细菌分离鉴定
分别用麦康凯培养基对 2 头死猪的肺脏、 肝脏、 肠道细菌进行分离培养， 结果表明:肝脏有细菌生长;肺脏也分离出细菌;结肠内容物分离出来的细菌长成粉红色的菌落， 镜检为红色小杆菌， 确定为沙门杆菌。细菌分离鉴定结果见 271 页彩图 5。
3 分析
1)经 PCＲ 检测， 猪蓝耳病毒、 猪圆环病毒均为强阳性， 结合临床症状及病理剖检， 说明该被检猪感染了猪蓝耳病毒、 猪圆环病毒， 也间接说明该猪场猪蓝耳病毒和猪圆环病毒感染率较高。
2)细菌的分离培养鉴定结果发现， 病猪肺脏、 肠道等器官已经继发感染了沙门杆菌， 主要是病毒病的发生造成机体的免疫力下降， 引发了继发感染， 形成病毒、 细菌的混合感染， 也是造成死亡的主要原因。
4 治疗
1)改善环境， 防止其他疾病的发生。基于猪场猪蓝耳病、 猪圆环病毒病等免疫抑制性疾病在该猪场感染率较高， 加上气温较低， 特别容易继发传染性胸膜肺炎等呼吸道疾病， 因此要加强猪场消毒及保温措施， 减少应激因素。
2)对初生仔猪进行猪蓝耳病、 猪圆环病毒病的抗体监测， 调整免疫程序， 提高全群的抗体水平。
3)由于前期用过很多的抗病毒及抗生素药物进行治疗， 对猪肝脏、 肾脏等脏器有较大损坏， 可给予保肝护肾的中药(如养元康);以及在饲料中添加清热解毒、 提高机体抵抗力的抗病毒中药(如瘟疫康);并通过药敏试验筛选出对沙门杆菌敏感的左旋氧氟沙星， 按照药物说明书饮水给药。
5 讨论
近一段时间， 猪场的初生仔猪及保育猪各种病毒性疾病频繁发生， 特别是混合感染情况比较多， 其主要原因如下。
1)不注重母猪的免疫及保健， 造成很多母猪处于隐性感染或带毒状态， 仔猪在母体内已经带有病毒， 出生后很快就发病;再者母猪通过乳汁排毒， 初生仔猪采食母乳 3 d 以内会表现出临床症状。
2)不注重哺乳仔猪的健康管理。产房的工作人员为了提高仔猪的成活率， 大剂量使用抗生素， 加大了仔猪肝脏、 肾脏的负担， 短时间内形成耐药性， 给后续治疗过程中临床药物的选择造成很大困扰， 效果不佳， 极易形成混合感染。此外， 由于哺乳期仔猪都处于亚健康状态， 过渡到保育阶段时机体的抵抗力较差， 加上更换饲料等应激因素的作用， 使得保育猪成为猪场最易发病的第二大群体， 这些都是造成死亡的重要原因， 因此要合理选择和使用药物， 加强哺乳期的饲养管理， 提高仔猪的免疫力， 进而提高保育猪的成活率， 减少疾病的发生。
3)不注重环境消毒。有些疾病如猪的流行腹泻， 主要的传播途径是接触传播， 饲槽、 围栏等都是传播途径， 因此除了要定期严格消毒之外， 还要加强平时圈舍的消毒工作;要选几种不同成分的消毒液交替使用， 防止产生耐药性， 以此消灭环境中存在的隐患。
（辽宁农业职业技术学院 姜凤丽）
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