猪支原体是猪呼吸道疾病综合征的主要病原之一[1]，临床症状主要表现为猪地方性肺炎（又叫猪气喘病，SEP），病猪和带菌猪是主要传染源，带菌母猪可垂直传染仔猪，猪群间主要通过接触传染[2]。猪鼻支原体（MHR）为猪呼吸道疾病综合征的第二致病原，可以引发肺炎或者协同猪肺炎支原体共同引起肺炎[4]。近几年的研究表明，猪肺炎支原体的感染可加重猪蓝耳病病毒的感染[5]。通过对多个规模化猪场的213份临床病料进行检测，分析总结出了猪鼻支原体感染猪群的现状及与猪蓝耳病病毒、猪肺炎支原体的混合感染的规律。

　　dNTPMixture、ExTaqDNA聚合酶、TRIZOL试剂等试剂，购自Invitrogen公司；M-MLV，购自Promega公司；猪肺炎支原体PCR检测试剂盒，购自大连宝生物工程有限公司。

　　临床样品采集于山东省地区的规模化猪场，全部为有肺炎症状的猪肺脏组织。免疫背景如表1：

　　1.3　临床病料检测 

　　1.3.1　病料中核酸的提取。将病料按1:3的比例与PBS缓冲液混合后充分研磨，冻融三次后离心，取上清液分别利用大连宝生物公司的猪肺炎支原体PCR检测试剂盒及Invitrogen公司的TRIZOL试剂对病料进行DNA及RNA提取；经RNA反转录成cDNA后，与病料DNA分别保存备用。

　　1.3.2　病料的PCR检测。支原体检测引物及反应体系参照刘茂军等[6]建立的猪肺炎支原体与猪鼻支原体鉴别双重PCR，PRRSV引物序列及反应体系参照邓雨修等不同引物RT-PCR方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的比较研究[7]，取PCR产物于1%琼脂糖凝胶电泳观察。

　　对规模化猪场的213份临床病料（肺脏）进行检测，检测结果如表3所示：

　　从结果中可以看出，PRRSV的临床检出率非常高，阳性率超过了80%（包括疫苗毒），而MHP与MHR的阳性率均超过了30%，说明猪场的支原体感染严重。在调查的规模化猪场中，MHR的感染比例（38.97%）超过了MHP的感染比例（32.39%），差异显著（P＜0.05）。同时，MHR与PRRSV的混合感染率（33.80%）超过了MHP与PRRSV的混合感染率（24.88%），差异极显著（P＜0.01）。

　　将46份免疫过猪肺炎支原体疫苗的病料和167份未免疫过猪肺炎支原体疫苗的病料进行分析，结果见表4、表5。

　　从表中可以看到，接种猪肺炎支原体疫苗的猪场，MHP的阳性率显著降低，但是，猪肺炎支原体疫苗的接种对于MHR的发病率并没有明显的改善（P＞0.05），甚至免疫场MHR的阳性率还高于未免疫场（P＜0.05）。而在MHP免疫猪场，PRRSV的检出率仍旧很高，达到了86.96%（包括疫苗毒），但PRRSV与MHP的混合感染率相对于未免疫场有了明显的改善（P＜0.05），而PRRSV与MHR的混合感染率相对于未免疫场没有明显的改观。

　　猪鼻支原体（MHR）是仔猪上呼吸道存在的正常菌株，与MHP相似。MHR能粘附于呼吸道上皮细胞上，且部分菌株能够引起肺炎、多发性浆膜炎、关节炎、中耳炎等。在地方性肺炎（SEP）的发生过程中，MHR常常作为第二致病菌，协同MHP共同或单独致病。如Kim等[8]证实，MHR感染实验猪，可引起猪的肺炎，并伴发多发性浆膜炎、关节炎及中耳炎等临床症状；中国的Lin等[9]通过人工感染试验发现，MHR可单独引起肺炎，并且发现在SEP病料中，MHR的阳性率从72.3%上升至99.4%。

　　本研究对部分规模化猪场有肺炎症状的肺脏进行了PRRSV、MHP、MHR的检测。通过检测结果的分析发现，目前MHR的总检测率高于MHP的检测率。PRRSV与MHP和MHR之间有着密切的关系，混合感染率均超过了30%，而且PRRSV与MHR的混合感染率要高于其与MHP的混合感染率。该结果在一定程度上表明猪鼻支原体与PRRSV之间的相互关系比猪肺炎支原体与PRRSV的关系更加密切（表2）。猪的鼻腔有阻止和过滤灰尘颗粒的作用，支气管纤毛可黏附和清除病菌；支原体肺炎属免疫抑制性疾病，一方面，可破坏纤毛，大大降低其黏附和清除病菌的功能；另一方面，猪支原体肺炎可使肺泡巨噬细胞对病菌的吞噬和消除能力下降，造成机体的免疫力下降。因此猪感染支原体后，可继发感染其它病毒或细菌，如PRRSV、PCV2、SIV、APP、HPS等[10]，多种病原共同作用，使得猪群临床发病情况变的尤为复杂。

　　使用疫苗接种的效果远远高于药物控制，且更加经济[11]。在MHP免疫场中，MHP的阳性率有了明显降低，说明MHP疫苗对MHP具有良好的保护效果，但是MHP疫苗的免疫对MHR的检出率没有显著的影响，说明猪肺炎支原体疫苗几乎不能提供对MHR的交叉免疫保护；虽然猪场免疫了MHP疫苗，但MHP的检出率达15.22%，可能跟免疫程序、猪场管理方式、猪群饲养条件以及机体内有其他免疫抑制因素（如霉菌毒素、PCV2等）使疫苗保护率降低有关。同时，MHP疫苗的接种，对于PRRSV感染未能体现出应有的效果，除了病料太少（仅46份）的原因外，猪鼻支原体感染可能是导致MHP免疫未能体现效果的重要原因。采集样品的猪场均使用PRRSV弱毒疫苗免疫，本检测方法尚不能区分疫苗毒与野毒，因此在免疫过MHP和PRRSV疫苗的46个猪场中，PRRSV的检测率高于MHP未免疫组，可能有疫苗毒的存在。在MHP免疫场，PRRSV与MHR的混合感染率相对于未免疫场没有明显的改善。同时，在免疫场的46份病料中有7份检测到MHP，而在这7份病料中同时检测到了PRRSV和MHR，尽管样本数量太少，但推测，MHR在很大程度上能够促进PRRSV的感染和传播，而且跟MHP的发生可能有很密切的关系。

（1.山东畜牧兽医职业学院，于　淼，王洪利；2.临沂市兰山区畜牧局，王新福；3.蒙阴县畜牧兽医局，王　涛；4.山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，王克伟，于　江，张玉玉，韩　红，吴家强)