盐酸沃尼妙林是新一代截短侧耳素类半合成抗生素，属二萜烯类，与泰妙菌素属同一类药物，是动物专用抗生素。主要用于防治猪、牛、羊及家禽的支原体病和革兰氏阳性菌感染。１９９９年由欧共体批准用于预防与治疗由猪痢疾短螺旋体感染引起的猪痢疾和由肺炎支原体感染引起的猪地方性肺炎［１－２］，是第一个全欧洲批准的兽用药物预混剂，被列为兽用处方药。２０１０年９月９日，农业部１４５７号公告批准我国研制的盐酸沃尼妙林原料及预混剂被农业部批准为国家二类新兽药。因此，在我国兽医临床上具有广阔的应用前景。

     盐酸沃尼妙林的化学合成方法已经有很多文献报道［３－６］，但存在很多问题，例如收率低，成本高，操作不方便等。为解决现有方法中的不足之处，本研究设计了如图２所示的合成路线。具体方法如下：以精制的截短侧耳素（２）为原料，经对甲苯磺酰氯（ｐ－ＴｓＣｌ）磺化后，与二甲基半胱胺盐酸盐反应，制得截短侧耳素半胱胺取代物；另外由Ｄ－缬氨酸、乙酰乙酸甲酯和氢氧化钾反应制得（Ｒ）－２－（１－甲氧羰基－２－烯丙基）氨基－３－甲基丁酸钾，经氯甲酸乙酯活化后与截短侧耳素半胱胺取代物反应，最后通过调节ｐＨ值，经反相萃取后，冻干得盐酸沃尼妙林。

     Ｘ－４型熔点测定仪（上海予正仪器设备有限公司），Ｖａｒｉａｎｃｈｅｍｉｎｏｖａ－００型核磁共振仪（美国瓦里安公司），Ａｇｉｌｅｎｔ１１００Ｓｅｉｅｓ高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），ＪＪ－１型电动搅拌器、ＳＨ２Ｄ型水循环真空泵、ＨＨ型恒温水浴锅、ＤＧＸ－９２４３Ｂ－１电热鼓风干燥箱（均为河南巩义科华仪器有限公司）。

     截短侧耳素（湖北鑫源顺医药化工有限公司，纯度８５％，批号２０１２０７０１），二甲基半胱胺盐酸盐（河北隆德医药化工科技有限公司，批号２０１２０３０１），Ｄ－缬氨酸（武汉大华伟业医药化工有限公司，批号２０１２０５０１），乙酰乙酸甲酯、Ｎ－甲吗啉、氯甲酸乙酯，甲基叔丁基醚、活性炭、对甲苯磺酰氯、氢氧化钠、乙酸乙酯、硼酸、氢氧化钾、异丙醇、盐酸、二氯甲烷，均为工业品。

     

     １．２．１　截短侧耳素的精制　先将截短侧耳素２５０ｇ溶于甲基叔丁基醚２０００ｍＬ中，搅拌溶清。然后加入活性炭５０ｇ，室温搅拌３ｈ进行脱色，过滤掉活性炭，滤液加热浓缩至约５００ｍＬ时有大量晶体析出，停止加热，冷却至室温，然后继续搅拌４ｈ。晶体经离心后，烘干得到截短侧耳素精品２２０ｇ（收率８８％），纯度９５％（ＨＰＬＣ法）。

     １．２．２　对甲苯磺酰基截短侧耳素（３）的合成　将对甲苯磺酰氯２０ｇ（０．１０５ｍｏｌ）溶于甲基叔丁醚３００ｍＬ，搅拌溶清后，再加入步骤（１）制备的截短侧耳素精品４０ｇ（０．１０５ｍｏｌ），滴加３０％的ａＯＨ溶液１５ｍＬ（０．１１ｍｏｌ），滴完升温回流反应３ｈ，后冷却至室温，过滤得固体，烘干得对甲苯磺酰基截短侧耳素５５ｇ（收率９８％）。质谱（ＭＳ）（ＥＳＩ：ｍ／ｚ５３３．６［Ｍ＋１］＋；核磁共振氢谱（１ＨＮＲ）（３００Ｈｚ，ＣＤＣｌ３），δ：０．６１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ），０．８６（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，３Ｈ），１．１６（ｓ，３Ｈ），１．２２－．３１（ｍ，２Ｈ），１．３２－１．３９（ｍ，５Ｈ），１．４１（ｓ，３Ｈ）１．５３－１．７８（ｍ，３Ｈ），２．０１－２．２８（ｍ，４Ｈ），２．４５（ｓ，３Ｈ），３．３３（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４８（ｓ，２Ｈ），５．１６－．２８（ｍ，２Ｈ），５．７５（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），６．３７（ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ）。

     １．２．３　截短侧耳素二甲基半胱胺取代物（５）的合成　将步骤（２）合成的对甲苯磺酰基截短侧耳素１６ｇ（０．０３ｍｏｌ）溶于乙酸乙酯２００ｍＬ，待清后，加入二甲基半胱胺盐酸盐（４）４．２５ｇ（０．０３ｍｏｌ，再加入氢氧化钠２．４ｇ（０．０６ｍｏｌ），保持温度在５０５５℃反应１０ｈ。反应完成后，加入硼酸１０ｇ，反应３０ｍｉｎ。过滤后，弃去滤渣，滤液浓缩至干，烘干得截短侧耳素二甲基半胱胺取代物１２．７ｇ（收率９１％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４６６．６［Ｍ＋１］＋；１ＨＮＭＲ（３００Ｈｚ，ＣＤＣｌ３），δ：０．６２（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，３Ｈ），０．８７（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，３Ｈ），１．１８（ｓ，３Ｈ，１．２２（ｓ，６Ｈ），１．２５－１．３２（ｍ，２Ｈ），１．３５－１．３９（，５Ｈ），１．４２（ｓ，３Ｈ），１．５４－１．７７（ｍ，３Ｈ），２．０３－２２９（ｍ，４Ｈ），２．５４（ｓ，２Ｈ），３．１２（ｓ，２Ｈ），３．３３（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４９（ｓ，２Ｈ），５．１８－５．２９（ｍ，２Ｈ，５．７６（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），６．４２（ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１２．０Ｈｚ，１Ｈ）。

     １．２．４　（Ｒ）－２－（１－甲氧羰基－２－烯丙基）基－３－甲基丁酸钾（６）的合成　将氢氧化钾９ｇ（０．１６ｍｏ）溶于异丙醇３００ｍＬ中，搅拌溶清后，加入Ｄ－缬氨酸１６ｇ（０．１３６ｍｏｌ）和乙酰乙酸甲酯１７ｍＬ（．１５７ｍｏｌ），搅拌回流反应３ｈ后，浓缩至约１２０ｍＬ时有大量固体析出，停止加热，冷却至室温，继续搅拌１ｈ。过滤得固体，烘干得到（Ｒ）－２－（１－甲氧羰基－２－烯丙基）氨基－３－甲基丁酸钾３３ｇ（收率９５．４）。１ＨＮＭＲ（３００Ｈｚ，ＣＤＣｌ３），δ：０．７９－．８７（ｍ，６Ｈ），１．７７（ｓ，３Ｈ），２．０２－２．１６（ｍ，Ｈ），２．２０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），３．４８（ｓ，３Ｈ），３．７２（，１Ｈ）。

     １．２．５　盐酸沃尼妙林（１）的合成　将步骤（４）合成的（Ｒ）－２－（１－甲氧羰基－２－烯丙基）氨基－３－甲丁酸钾２０ｇ（０．０７９ｍｏｌ）和Ｎ－甲基吗啉８．８ｍＬ（０．０８ｍｏｌ）溶于甲基叔丁基醚２４０ｍＬ，搅拌解，滴加氯甲酸乙酯８ｍＬ（０．０８４ｍｏｌ），加入步骤３）合成的截短侧耳素二甲基半胱胺取代物（５）３３ｇ（０．０７１ｍｏｌ），控制温度在２０℃，反应４ｈ。反应完成后，加入纯水２５０ｍＬ搅拌，用２ｍｏｌ／Ｌ盐调节ｐＨ值恒定在２～２．５之间，搅拌反应５ｈ后，静止分层。收集水层，弃去甲基叔丁基醚层，水层依次用二氯甲烷３０ｍＬ、乙酸乙酯３０ｍＬ、甲基叔丁基醚０ｍＬ各萃取一次后，最后收集的水层在真空下抽干残留的有机溶剂后，冻干得到盐酸沃尼妙林３９．３ｇ（收率９２．１％），总收率为６９％。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ５６５．８［Ｍ＋１］＋；１ＨＮＭＲ（３００Ｈｚ，ＣＣｌ３），δ：０．７１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，３Ｈ），０．８９（ｄ，Ｊ＝９０Ｈｚ，３Ｈ），１．０９－１．１９（ｍ，１７Ｈ），１．２４（ｓ，６Ｈ），１．２－１．３８（ｍ，３Ｈ），１．４１－１．５２（ｍ，４Ｈ），１．６０－１．８８（，３Ｈ），２．４２－２．５０（ｍ，３Ｈ），３．１２－３．３３（ｍ，１Ｈ），３．５－３．８７（ｍ，１Ｈ），４．０８－４．２７（ｍ，１Ｈ），５．１６－５．３１（，２Ｈ），５．８１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），６．４４（ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈ，１２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｓ，１Ｈ），８．４４（ｓ，３Ｈ）。

     中间体及终产物都经过ＭＳ和１ＨＮＭＲ进行了确证，结果显示与理论结构一致。

     

     参考进口兽药标准欧洲药典（ＥＰ６．０）对本工艺合成的盐酸沃尼妙林进行了质量检测，检测结果见表１。

     

     从上述结果可以看出，采用本合成工艺路线可以生产出含量高、杂质少的合格的盐酸沃尼妙林原料药。

     截短侧耳素的精制在文献［７］中先后使用了甲醇、水、石油醚、乙酸丁酯、乙醚和乙酸乙酯６种溶剂进行重结晶，过程复杂且繁琐。本合成工艺对此进行了改进，用甲基叔丁醚对截短侧耳素进行重结晶，简化了操作过程，提高了收率（达８８％）。

     在制备对甲苯磺酰基截短侧耳素（３）时有的文献［４］采用直接蒸干溶剂的方法，导致部分未反应的反应物如对甲苯磺酰氯、截短侧耳素、氢氧化钠和一些不明杂质直接包在产物（３）中被带入下一步反应。还有的文献［５］把滤液醚层进行了水洗再蒸干，但是，这样也只是去除了水溶性的杂质而不能去除有机物杂质。而本工艺用甲基叔丁基醚作为溶剂，过滤直接得到（３）。在该条件下，产物（３）在甲基叔丁基醚中的溶解性很低，而对甲苯磺酰氯和截短侧耳素可以溶解在其中，过滤可以使产物和反应物及杂质能够有效的分离，得到的产物（３）纯度更高。在制备截短侧耳素二甲基半胱胺取代物（５）时有的文献［６］采用的是混合溶剂，混合溶剂回收困难且不能再利用，这对于生产成本的控制和环境保护具有重大影响。本工艺采用乙酸乙酯作为单一溶剂，并且在反应结束后选用了一种合适的酸———硼酸与多余的氢氧化钠成盐而不与（５）成盐。其优点体现在两个方面，一是使用单一溶剂，可反复回收使用；二是使用硼酸直接中和多余的氢氧化钠后过滤蒸干得到产物。

     在制备盐酸沃尼妙林时本工艺采用氯甲酸乙酯作为活化试剂，因为生成的混合酸酐相比于氯甲酸烯丙酯生成的混合酸酐［５］，亲合性更强，更容易离去，另外由于对起始原料截短侧耳素进行了质量控制（通过重结晶把截短侧耳素的纯度由８５％提高到９５％），所以操作过程更为简便，纯度和收率也更高。

     以精制的截短侧耳素为原料，经对甲苯磺酰氯磺化后，与二甲基半胱胺盐酸盐反应，制得截短侧耳素半胱胺取代物；另外由Ｄ－缬氨酸、乙酰乙酸甲酯和氢氧化钾反应制得（Ｒ）－２－（１－甲氧羰基－２－烯丙基）氨基－３－甲基丁酸钾，经氯甲酸乙酯活化后与截短侧耳素半胱胺取代物反应，最后通过调节ｐＨ值，经反相萃取后，冻干得盐酸沃尼妙林，总收率为６９％，所得产品进行了结构确证并按照ＥＰ６．０进行了质量检测，产品具有含量高、杂质少等优点。本合成路线收率高，操作方便，具有较好的工业化前景。

（武汉回盛生物科技有限公司，薛克友，葛健，沈华，张卫元，刘洁）