辽宁省某市奶牛布病感染状况及群间传播风险因素调查
奶牛布病是由布鲁氏菌引起的以奶牛流产和繁殖障碍为主要特征的一种慢性人畜共患传染病，严重危害家畜和人类健康，在世界许多国家和地区都曾造成巨大的经济损失，以美国为例，1934—1937年根除布病费用达35亿美元，然而仅在1952年1年由布病引起奶牛产奶量下降和流产而导致的损失就达400亿美元[1]。并对人类公共卫生安全产生巨大的威胁。该病在全球范围内广泛流行，目前仅有北欧、中欧、加拿大、日本、澳大利亚和新西兰被承认已根除布鲁氏菌病[2]。在我国，《国家中长期动物疫病防控规划（2012—2020）》规定布鲁氏菌病为重点防控的16种动物疫病之一。并且要求到2015年，辽宁省奶牛布病达到稳定控制标准。该市是我省奶牛养殖主产区之一，以现代流行病学方法对该市奶牛布病感染状况及风险因素进行调查，对制定奶牛布病针对性防控策略，有效推动我省奶牛布病防控工作，具有一定的示范意义。
为了解该市奶牛场布鲁氏菌病流行现状，并提出防控该病的有效策略，开展了针对该市奶牛场的布病感染状况和风险因素调查。
1 材料和方法
1.1 研究设计
1.1.1 场群流行率和个体流行率。辽宁省对奶牛布病的防控策略为“全群检疫加扑杀”。结合省奶牛布病净化工作，2013年对该市辖区内所有奶牛进行布鲁氏菌病普查，包括187个场群，37888头奶牛。获知该市奶牛布病的个体表观流行率和群表观流行率。查阅文献确定诊断试验敏感性和特异性，通过公式TP=（AP+Se-1）/（Se+Sp-1）计算真实个体流行率。
1.1.2 检测方法。虎红平板试验和试管凝集试验的垂直试验。查阅文献得知该垂直试验敏感性81%，特异性99.9%[3]。
1.1.3 风险因素调查。以场群为单位采用问卷调查方式开展病例-对照研究。阳性奶牛定义为虎红平板试验和试管凝集试验的垂直试验结果为阳性的奶牛；阳性群定义为群内至少有一头阳性奶牛的场或散养户。阴性群定义为场内未检测到奶牛布病的场或散养户。所有阳性群均列为调查对象，并在该市辖区内遵循同一区域且养殖条件相似的匹配原则选择3倍数量于阳性群的阴性群作为对照群进行调查。
1.2 数据收集和整理
设计了《奶牛布病风险因素调查问卷》，分别针对饲养管理、人员来访、与其他动物混养情况、产后胎盘和流产胎儿处理情况、场内生物安全措施、奶牛销售、挤奶情况等7个方面的23项风险因素展开调查，变量均设计为二分类变量。收集的数据录入Microsoftexcel2010。
1.3 数据分析
所有变量均为二分类变量，以场群布病状态为因变量，采用Fisher确切概率检验对23个协变量（风险因素）进行单变量分析。筛选出P<0.2的变量，进行多变量logistic回归模拟，建立非条件logistic回归分析模型。对于筛选出的变量首先进行双变量相关性检验，若有变量间Pearson相关系数>0.4，在其中选一个最符合生物学常识的进入logistic回归模型[3]，将另一个剔除。执行回归操作时采取“全部进入逐个排除”的方式，以p<0.05作为检验水准。并对最终保留的变量进行交互作用检验。采用Hosmer-Lemeshow法对建立的模型进行拟合优度检验。P>0.05说明预测概率获得的期望频数与预期频数无统计学差异，模型拟合较好。对最终建立的logistic模型制作ROC曲线，检验模型预测概率的拟合优度。以上统计学分析均应用SPSS20.0和EpiInfoTM7完成。
2 结果
2.1 群流行率和个体流行率
对该市辖区所有奶牛进行普查，包括187个场群，37888头奶牛，共检测到19个阳性场，67头阳性奶牛，群表观流行率10.16%，个体表观流行率0.18%。根据公式TP=（AP+Sp-1）/（Se+Sp-1），计算得出真实个体流行率为0.99%，真实群流行率12.44%。
2.2 风险因素调查结果
下发至19个阳性场和57个阴性场共计76份调查问卷全部回收，回收率100%。根据调查问卷结果，对单因素在感染场和阴性场间的分布做了分析（表2），筛选出单因素分析中p<0.2的14项因素，对这14项变量进行相关性检验，结合生物学知识，筛选出“没有购销专用车辆”“与犬混养”“进圈时不穿工作服及胶靴”等3个变量进入最终的logistic回归模型，分析结果发现“无专用购销车辆”（OR=3.57，95%CI:1.04-12.5，p=0.04），“进圈时不穿专用工作服和胶靴”（OR=5.0，95%CI:0.97-25.00，p=0.06），“与犬混养”（OR=12.39，95%CI:0.97-157.56，p=0.05）是该市牛场感染布鲁氏菌的风险因素。针对logistic回归模型建立了ROC曲线，曲线下面积为71.6%，表明此模型预测该市奶牛布病群间传播风险能力为中等。
3 讨论
本研究通过对该市奶牛布病的全群普查，掌握了该市奶牛布病的场群流行率和个体流行率，并以问卷调查的方式开展了一次病例—对照研究。
由于本研究样本量较小，故通过Fisher确切概率检验对调查获得的风险因素数据逐一进行单因素分析，确定了对该市奶牛布病群间传播有统计学意义的6项因素。但在建立logistic回归模型时，放宽了进入模型变量的选择条件，准入条件设为Fisher确切概率检验p<0.2。对符合条件的14项变量进行了相关性检验，结合生物学知识，最终选择了“自繁自养”“收拾棚圈时穿专用工作服和胶靴”“与犬混养”“上门收购”“无专用购销车辆”等5个变量建立logistic回归模型，逐个剔除变量，观察其他因素OR值变化，同时检验模型变化情况，最终的logistic回归模型包括“进圈时不穿专用工作服和胶靴”“与犬混养”“无专用购销车辆”等3个变量。针对该模型制作的ROC曲线下面积为71.6%，表明此模型预测该市奶牛布病群间传播的能力为中等，该市存在其他影响奶牛群间布病传播风险因素，有待进一步研究探索。
由于本次病例-对照研究是以问卷调查方式进行，而布鲁氏菌病相关防控知识在奶牛饲养场户中已广泛普及，在调查时养殖场户对某些问题的回答可能存在偏倚，例如流产胎儿的处理方式，回答随意丢弃和烹饪食用的比例可能比实际偏低。在以后的研究中还需进一步探讨如何设计更特异的问题，尽可能降低偏。
4 结论
4.1 采用虎红平板试验和试管凝集试验的垂直试验对该市所有奶牛场中的全部奶牛进行布鲁氏菌病感染状况普查，结果显示该市2013年奶牛布病个体流行率为0.99%，场群流行率为12.44%。
4.2 进行了针对该市奶牛布病群间传播风险因素的病例-对照研究，结果表明与犬混养可能是该市奶牛布病群间传播重要风险因素，而奶牛销售时自有购销专用车辆和提高场内生物安全措施如进圈穿专用工作服可降低奶牛场群间布病传播风险。
（1.辽宁省动物疫病预防控制中心/辽宁省动物医学研究院，辽宁沈阳，崔基贤，谷志大；2.中国农业科学院
哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/疫病诊断中心，王靖飞）
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