布鲁菌病阳性、阴性血清、布鲁菌虎红平板凝集试验抗原、布鲁菌试管凝集试验抗原均由中国兽医药品监察所提供，牛、羊、猪血清样品由地区动物疾控中心采集，病原学样品由县（市）兽医站提供。布病平板凝集抗原，批号201102、201202，201302，布病平板凝集阴性血清，批号201101；布病平板凝集阳性血清，批号：201001。

     笔者于2011-2013年在吐鲁番地区所辖两县一市的27个乡（镇）牛、羊、猪养殖密集地，分别对商品代养场、散养户、活畜交易市场和屠宰场动物随机采集血清样品。共采集牛血清样品4710头份，羊血清样品4354头份，猪血清样品190头份。家畜病原学样品主要来自吐鲁番市的亚尔乡（商品代养场）、艾丁湖乡、恰特卡勒乡；鄯善县辟展乡、鲁克沁镇、城镇、东巴扎乡；托克逊县的伊拉湖、夏乡、郭勒布依乡（均为商品代养场）。样品取自非正常羊流产胎儿胃液以及肝脏、脾脏。流产母畜年龄在2～6岁之间，均没有接种布鲁氏杆菌疫苗记录。产羔数在1～3胎之间，以3胎为多。流产母羊品种繁杂，主要有山羊和本地土种羊等,共采集样品120份。

     培养皿、高压锅、接种环、镊子、手术剪刀、酒精灯、生化培养箱、低温冰箱、试管架、75%酒精、95%酒精、3%来苏尔、Tryrtose、胰蛋白、琼脂粉、氯化钠、葡萄糖。工具与试剂均由实验室提供。

     在灭菌洁净的玻璃板片上，用移液枪分别吸取被检血清30μL与虎红平板凝集抗原3OμL混合均匀，在室温(20℃)4min内记录反应结果。同时以阳、阴性血清作对照。被检血清出现任何程度颗粒状或絮状的凝集现象均判为阳性，完全不凝集的判为阴性，无可疑反应。初筛阳性标准为虎红平板凝集实验(RBPT)阳性或疑似；血清学检查方法阳性标准为试管凝集实验(sAT)阳性。

     本试验按《家畜布氏杆菌病试管凝集反应技术操作规程及判定标准》进行。首先稀释血清，羊血清稀释度为1∶12.5、1∶25、1∶50和1∶100，牛血清样品稀释度为1∶25、1∶50、1∶100和1∶200。加入等量稀释后的抗原，混匀，则血清稀释度依次为1∶25、l∶50、l∶100、1∶200；1∶50、1∶100、1∶200和1∶400。同时做阴性对照和阳性对照及抗原对照，并配制比浊管。将全部试管、对照管及比浊管充分震荡后置37℃恒温箱中作用20～22h，然后以比浊管为标准判定结果。如果试管的底部出现点状或圆盘状沉淀，则不需比较清亮度。如果试管的底部出现倒伞状沉淀，则需要用比浊管比较其清亮度。如果其清亮度在1∶50达++以上，l∶100达++以上，则判定为阳性。

     (1)培养基的配置。按照配置标准称取胰蛋白40g、Tryrtose40g、氯化纳10g、葡萄糖2g,融于2L水中，搅拌充分溶解后高压灭菌20min。pH值控制在6.8～7.0之间。

     (2)培养皿准备。将灭菌的培养皿放入超净工作台内，等灭菌培养基温度适宜时将其倒入培养皿中，每个培养皿最少倒置20mL培养基。液体倾倒时缓慢转圈移动培养皿，使液体均匀覆盖整个器皿底部，不要产生气泡并注意无菌操作。等培养皿完全凉下来后，倒置放于37℃冰箱，无污染观察48h。

     (3)病料接种前准备。3%来苏尔消毒液、接种环、镊子、手术剪刀、酒精灯等器具，试验开始前提前放入无菌间并紫外线灭菌30min，灭菌完等20～30min后人员再进入，以免紫外线灼伤皮肤。人员进入要穿一次性防护衣，口罩，帽子，鞋套、乳胶手套。

     (4)病料接种。接种前将培养皿平均划分成3份，按照接种病料种类标注。接种时一手拿培养皿，一手拿接种环，将酒精灯置于两者之间，用拇指和食指将培养皿向上打开15°左右，将采集的病料用消毒的剪刀切开，用接种环采集新鲜切面涂琼脂平板。接种时采用之字形，不要反复涂抹，会造成污染。一份样品接种完成以后在培养皿标注接种日期、时间、样品号、样品名称。接种完成后将培养皿正放在37℃恒温培养箱内培养，24h后反放培养皿。分别在培养24h、36h、48h、72h、84h、96h时，观察菌类生长情况。其余样品方法如上，同时做阴阳性对照。

     若在培养72h后有菌落长出，且呈现针尖大小、透明状，应进一步做染色鉴定。随机挑取单个菌种接种玻片，火焰固定或自然干燥固定，加结晶紫染色1min,清水冲去；加碘液1min,水洗；加95%乙醇摇匀10～30s,水洗；加沙黄复染30s,水洗。显微镜下观察，同时做阴阳性对照。

     接种病料在12h观察时无任何变化，24h观察有极个别杂菌生长，数量较少；36h、48h、60h、72h、84h、96h观察，无菌落生长，均显示阴性。

     将培养皿中72h生长的菌落染色观察，显微镜下没有观察到布鲁氏杆菌,结果显示阴性。阳性、阴性对照成立。

     吐鲁番地区中心实验室2011-2013年对吐鲁番地区牛、奶牛、羊和猪等易感动物采用总体随机抽样的方法，测定商品代养场、散养户、活畜交易市场、屠宰场血清学样品和家畜非正常流产胎儿病原学监测结果均为阴性。总体来看，虽然吐鲁番地区近几年布病监测结果较好，但全疆布病总体形势呈上升趋势。再加上吐鲁番地区畜牧业主要以牛羊育肥为主,牲畜大进大出、调运频繁，动物疫病风险较大。尤其是布鲁氏菌病等慢性疾病不在国家强制免疫范围内，加之个体养殖户的不断增多，市场交易频繁，牲畜的流通加快，检疫、免疫、病畜的净化等措施跟不上，有可能致使布病死灰复燃，给畜牧业和人类健康带来严重危害，使吐鲁番地区“两病”防控形势也日趋严峻。布病防治工作要严格按照《国家中长期动物疫病防治规划（2012-2020年）》要求，按照人畜同步、分区防治、分类指导的原则，推动实施本地区布病防治计划，并做好监测、扑杀和无害化处理工作。

（新疆吐鲁番地区动物疾病控制与诊断中心，祁巧芬）