2014年5月20日某养猪场23头40~60日龄的仔猪接连发病，表现为发热、精神沉郁、食欲不振，有些表现为腹泻、呼吸急促、咳嗽、结膜炎等。畜主起初按感冒用药，用药两天症状有所缓解，一旦停药又复发。经问诊调查得知该场仔猪14日龄口服仔猪副伤寒疫苗，25日龄注射猪瘟、猪丹毒和猪肺疫三联疫苗。

     病猪发热，体温高达40～41℃，精神沉郁，食欲不振，被毛粗乱，皮肤苍白，伴有黄疸，有的在耳部、腹部可见出血性紫红色斑块；部分病猪有神经症状，呈现肌肉震颤，关节肿胀，站立不稳，四肢呈划水状。随着病情的发展，病猪眼圈发紫，耳朵发青，身体发绀，最后窒息死亡。

     病程较长的猪解剖后可见全身淋巴结特别肿大，呈白色、红色和紫色等，切面硬度增大、坏死，有的出血；脾脏肿大、出血、边缘有出血性梗死及丘状突起，肉样变；肾脏肿大，切面外翻，条纹状出血，表面颜色不一，有土黄色、紫红色，散布有出血点、坏死灶；肺肿大，呈弥漫性间质性肺炎，有的呈纤维素性肺炎，胸腔有淡黄色积液；肝脏质脆，表面有灰白色坏死灶；心包积液，有纤维素性心包炎。

     无菌采取病死猪淋巴结、肝、脾、肺等病料，涂片后革兰氏和瑞氏染色，显微镜检查未见致病性细菌。

     无菌采集病死猪淋巴结、肺、肝、脾等病料，将病料分别接种于麦康凯、琼脂培养基中，37℃恒温培养24～48h，未见细菌生长。

     猪圆环病毒2型（PCV2）PCR检测试剂盒，购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司。仪器：分析天平、水浴锅、台式高速离心机、真空干燥器、PCR扩增仪、电泳仪、电泳槽、紫外凝胶成像仪（或紫外分析仪）、液氮或-70℃冰箱、微波炉、组织研磨器、-20℃冰箱、可调移液器（2μL、20μL、200μL、1000μL），均由山西省农业科学院动物临床医学研究室提供。耗材：眼科剪、眼科镊、称量纸、20mL一次性注射器、1.5mL灭菌离心管、琼脂糖、500mL量筒、500mL锥形瓶、吸头（10μL、200μL、1000μL）、灭菌双蒸水，均由山西省农业科学院动物临床医学研究室提供。

     （1）样品采集。取病死猪有明显病变脏器的病变部与健康部交界处组织；待检活猪，用注射器采血5mL。2～8℃保存，送实验室检测。

     （2）样品处理。每份样品分别处理。

     ①组织样品处理。称取待检病料0.1g置组织研磨器中剪碎并研磨，加入1.5mLpH7.2的PBS或生理盐水继续研磨。取已研磨好的待检组织液，置1.5mL灭菌离心管中，8000r/min离心5min，取上清液100μL，再加入500μL消化液和10μL蛋白酶K，混匀后，置55℃水浴中过夜。

     ②全血样品处理。待血凝后取血清放于离心管中，8000r/min离心5min，取血清100μL，加入500μL消化液和10μL蛋白酶K，混匀后，置55℃水浴中过夜。

     ③阳性对照处理。将试剂盒中阳性样品混匀后取100μL，加入500μL消化液和10μL蛋白酶K，混匀后，置55℃水浴中过夜。

     ④阴性对照处理。取灭菌去离子水100μL，加入500μL消化液和10μL蛋白酶K，混匀后，置55℃水浴中过夜。

     （1）病毒模板DNA的提取：

     ①从水浴锅中取出已处理的样品、阴性对照和阳性对照，分别加入600μL酚/氯仿/异戊醇混合液（用该液之前不要晃动，不要吸到该液上层保护液），用力颠倒10次混匀，12000r/min离心10min。

     ②取500μL上清液置于灭菌离心管中，加入500μL异丙醇，混匀，置液氮中3min或-70℃冰箱中30min。取出样品管，室温融化，13000r/min离心15min。

     ③弃上清液，沿管壁缓缓滴入1mL70%乙醇，轻轻旋转1周后倒掉，将离心管倒扣于吸水纸上1min，再将离心管真空抽干15min或50℃烘干（以无乙醇味为准）。

     ④取出样品管，用30μL灭菌去离子水溶解沉淀，作为模板备用。

     （2）PCR扩增：每份总体积20μL，取16μLPCR反应液（用前混匀），2μLTaqDNA聚合酶，2μL模板DNA（见4.3.3中④），混匀，作好标记。扩增条件为94℃3min后，94℃30s，62℃45s，72℃45s，循环35次，72℃延伸10min。

     （3）电泳：称2g琼脂糖放于500mL锥形瓶中，加入50倍稀释的TAE电泳缓冲液200mL（即取4mL50倍TAE液用双蒸水稀释至200mL），于微波炉中熔解，再加入10μL染色液混匀。在电泳槽内放好梳子，倒入琼脂糖凝胶，待凝固后将PCR扩增产物15μL混合3μL上样缓冲液，点样于琼脂糖凝胶孔中，以110～120V电压于50倍稀释的TAE电泳缓冲液中电泳，紫外灯下观察结果。

     PCV2阳性对照出现1154bp扩增带、阴性对照无带出现（引物带除外）时，试验结果成立。被检样品出现1154bp扩增带为PCV2阳性，否则为阴性。结果3、4、5号被检样品在1154bp出现扩增带，诊断为猪圆环病毒病（图1）。

     此病的预防，目前还没有比较有效的方法，大多强调加强卫生和饲养管理，倡导全进全出的饲养模式。

     本病发生的特点是猪群一旦侵入PCV2就可能增加其他病原协同感染的几率，并最终导致临床发病。因此，对继发其他传染病的防控尤为重要，及早发现、有效隔离和尽可能控制本病横向传染也是非常重要的。建立猪场完善的生物安全体系，将消毒工作贯穿于养猪生产的各个环节，减少或杜绝猪群继发感染的几率；科学的饲养与管理，保持舍内良好的环境卫生，提高猪群的抵抗力。

     制定群体药物预防方案，控制猪群的细菌性继发感染，是目前规模化猪场的常规技术。对有临床症状的猪进行隔离治疗，实行对症疗法：1）5%葡萄糖生理盐水、头孢拉定、地塞米松（按说明书治疗剂量使用）混合静注；2）抗病毒多肽，肌肉注射，每天1次，连用7d；3）对于高热不退的猪应配合复方柴胡注射液，肌肉注射，每天1次，连用3d。采取以上措施后猪场疫情得到了很好的控制，未增加新发病猪和死亡猪。

（山西省农业科学院畜牧兽医研究所，武守艳，陈剑波，杨丽华，董春光，韩文儒，夏艳婷，韩一超）