从上述情况，难以对本病做出明确诊断。为此，进行了实验室诊断。

     采集鸡群发病3d～4d后的病料。其一，用棉签采集病鸡鼻腔和气管的黏液，放入灭菌瓶中。其二，采集病鸡的病变肺脏。

     新城疫(ND)标准抗原，ND标准血凝抑制抗体(HI)，由哈尔滨兽医研究所生产。

     禽流感标准抗原(H5、H9)，配套的标准HI抗体，由哈尔滨兽医研究所生产。

     普通营养琼脂，实验室自己制备。

     恒温恒湿培养箱(型号LHS-250SC，上海一恒科技有限公司)、离心机(型号80-1，上海手术器械厂)、96孔血凝板、微量移液器、灭菌一次性注射器、研钵、滤菌器和0.22μm滤膜等。

     ⑴病料棉签瓶中加灭菌生理盐水5mL，冻融3次，2000r/min离心，取上清液滤菌器除菌。病鸡的病变肺脏剪碎，放入消毒的研钵中研磨。研磨过程中，冻融3次，并按常规加抗生素抑菌。

     ⑵上述处理的病料分别接种9日龄的鸡胚，对照组接种灭菌生理盐水。孵化24h，照胚后去除死亡的鸡胚。分别在孵化48h和96h后，收取鸡胚尿囊液。同时观察鸡胚的病变。

     ⑶对收取的尿囊液进行菌检和血凝性检查。菌检阴性的尿囊液做第二代接种。按上述操作再进行第三代接种。对有血凝性的尿囊液进行血凝抑制(HI)试验，分别以ND标准血清，禽流感H5、H9、H7标准血清按常规进行HI试验。

     ⑷根据传染性支气管炎病毒能耐受pH2酸度而新城疫病毒不能的特性，分别在鸡胚有病变而没有血凝性和有血凝性的尿囊液中，加入盐酸，使其终浓度达1％，37℃作用1h。之后，接种鸡胚。对照组接种1％浓度的盐酸。

     ⑸收取上述处理后孵化的鸡胚尿囊液，再传一代。检测尿囊液的血凝性同时观察鸡胚病理病变。鸡胚出现典型IB病变，尿囊液没有血凝性的，即为去除ND病毒的传染性支气管炎病毒液。

     ⑹血凝干扰体外试验,以病料分离时，有血凝性的鸡胚尿囊液1︰1加入去除ND病毒的传染性支气管炎病毒液，混合后，做血凝性试验。同时，以Lasota新城疫疫苗病毒株同样加入上述IB病毒液进行血凝性检测。

     ⑺血凝干扰体内试验，先于9日龄的鸡胚中，接种上述HCl处理的传染性支气管炎病毒，孵化18h，再接种分离的ND病毒株。Lasota新城疫疫苗病毒株按同样方法接种。对照组为新分离的ND病毒株和Lasota新城疫疫苗病毒株。接种后分别于48h和72h，收取尿囊液，检测各组尿囊液血凝效价。

     病料接种鸡胚后，棉签病料经离心、滤菌处理的，没有污染，而病料肺脏研磨后，加抗生素抗菌的效果不佳，24h时照胚，胚液浑浊，收取尿囊液菌检，有菌。48h后鸡胚全部死亡，表明常规用青链霉素抑菌已经不能达到试验要求。用离心滤菌的方法效果理想。病毒分离情况见表1。

     试验结果表明，对照组鸡胚生长正常，尿囊液检测没有血凝性。

     病料1经二代鸡胚接种，没有检测到血凝性。但鸡胚孵化4d后，第一代鸡胚出现与对照组相比胚体发育不良，剖检见鸡胚输尿管尿酸盐沉积。第二代出现明显的侏儒胚病变，鸡胚肾脏呈雪花样尿酸盐沉积。表现出较典型的传染性支气管炎病毒感染症状(图1)。

  

     病料2经二代鸡胚接种，第一代有50％的鸡胚出现血凝性，血凝效价达26～28。以有血凝性的鸡胚尿囊液传第二代，孵化48h血凝效价达210～212，96h血凝效价稳定在210～213。用已知ND标准血清和禽流感H5、H7、H9标准血清，按常规以HI试验鉴定病毒结果见表2。

  

     从试验结果判断，分离的有血凝性病毒是新城疫病毒。

     以HCl处理的病毒分离液，接种鸡胚为F1代，收取尿囊液，不加盐酸再接种鸡胚为F2代。试验结果见表3。

  

     试验结果表明，病料1经HCl处理后，经鸡胚接种二代，出现典型的IB症状，与未处理的病变表现没有明显变化。病料2经HCl处理后，血凝性消失。鸡胚表现出典型的IB症状，说明新城疫病毒已经去除。

     体外试验是直接将二种病毒按1︰1混合，对照组为单一的病毒液按1︰1加入生理盐水。检测血凝效价。试验结果见表4。

  

     试验结果表明分离的IB病毒对分离的ND病毒的血凝性有一定的干扰，但不明显。对新城疫疫苗病毒的血凝性没有干扰作用。从试验结果分析，直接的体外干扰试验不能说明其干扰作用。

     按常规传染性支气管炎病毒鸡胚体内干扰试验结果见表5。试验结果表明分离的IB野毒对分离的ND野毒有明确的血凝干扰作用，而对新城疫疫苗Lasota毒株的血凝干扰作用不明显。

     在此病例中，同群病鸡的不同病料经接种鸡胚分离病毒时，病料1仅分离出传染性支气管炎病毒，而接种病料2的鸡胚中，IB病毒和ND病毒都有生长。在诊断此病例时，正是由于接种病料的鸡胚中只出现IB的典型症状，而没有血凝性，才提示在有血凝性的分离病料中可能还存在没有血凝性的IB病毒。后经酸处理有血凝性的鸡胚分离液，证实了有些采集的病料中存在二种病毒。

     禽流感、新城疫、传染性支气管炎等鸡的传染病，在临床表现上都有呼吸道症状，很多时候仅凭临床症状难以做出明确诊断。通过实验室分离病毒再进行病毒鉴定是最确实的诊断途径。但是在对病毒混合感染进行实验室诊断时，有血凝性的病毒由于检测方便，鉴定也容易，可能忽视了没有血凝性的病毒混合在其中，导致诊断不全面。为避免此现象，除进行血凝性检测外，要注意观察接种鸡胚的病变，防止漏检IB病毒。更好的方法是研究能检测多种病毒(症状相似)的多重PCR方法，以防止漏检。

     本病例分离的ND病毒株血凝性受到IB病毒的明显干扰，其特性与新城疫B1株(新城疫Ⅱ系疫苗)类似。查询本群鸡用于预防新城疫接种的疫苗，均为lasota毒株，并未使用过新城疫Ⅱ系疫苗，因此表明分离的ND病毒是具有新城疫B1株特性的野毒，致病力不强。一般分离IB病毒，要在鸡胚中传代3～5代，才能出现明显的侏儒胚症状。而本病例中，只传了二代，就出现明显侏儒胚现象，提示本次分离的传染性支气管炎病毒毒力可能毒力较强。

     本病例中，有的病鸡病料中仅含有IB病毒，有的含有IB、ND二种病毒，但在临床症状上没有显著差别。发病鸡群从临床表现来看，死亡率不高，但病程较长，可能提示新城疫和传染性支气管炎混合感染，导致二种病毒相互干扰，降低了病毒(尤其是传染性支气管炎病毒)对鸡体的毒力。但是，可能由于病毒相互作用，使机体抗感染的免疫力不能正常产生，临床表现为病程延长。

     根据本病例做出的诊断，养鸡场在以后的肉鸡饲养时，调整了传染性支气管炎和新城疫的免疫程序和所使用的疫苗，有效地防止了传染性支气管炎和新城疫的发生。

(上海旺园家禽养殖专业合作社，陈印权；上海申浦家禽育种有限公司，徐敏，钱伟；上海交通大学农业与生物学院，吴祖立，马犇，费政)