影响重大动物疫病抗体监测的因素分析

谢先钊 重庆市奉节县动物疫病预防控制中心

    重大动物疫病抗体监测是诊断动物疫病、重大疫情监测、免疫效果评价、重大疫情预警、预报、疫病控制等工作的重中之重。本文从样本因素、试剂影响因素、实验室操作条件、实验室所用设备情况等四方面分析了这几个环节对重大动物疫病抗体监测质量的影响，旨在为提高重大动物疫病抗体监测质量提供理论参考和技术借鉴。

1　样本因素
    样本的确定对动物重大疫病抗体监测结果的影响比较明显，尤其是样本数量的确定。样本数量指的是满足抗体监测试验结果所需要的动物数，实际样本数的确定还可采用监测方法有着很大的关系。目前样本数的确定主要有二种方法，一种是经验估算法：根据长期的动物重大疫病监测经验，小型动物（鼠、蛙）重大疫病抗体监测数每组要保证在10～30例。计量资料获取2组比较时，每组至少要10例；计数资料获取2组比较，每组至少要30例。中型动物（兔、豚鼠）重大疫病抗体监测数每组要保证在8～12例。计量资料获取2组比较时，每组至少要6例；计数资料获取2组比较，每组至少要20例。大型动物（牛、羊、猪）重大疫病抗体监测数每组要保证在5～10例。一种是计算法，这是根据统计学原理进行的方法。这种方法是在科学验证的基础上，参照预期监测结果以及测验所需要的精确度，最终确定样本数。这种方法较为科学，完全符合统计学原理。就猪而言，抽取多少比例的样本进行监测才具有可信度呢？很多人是根据群体染病百分率来取样，实际上这样的做法是不科学的，较为严谨的做法是采用计算法。美国爱德仕公司区域经理马祥表示，要检测的数据可信度高，参考价值大，必须按照规定抽取一定的样品进行检测。爱德仕公司提供的建议是按照95% 置信区间取样。每个检测群体大概需要30头。樊福好博士表示，大约每个群体抽取样品28～30头基本达到可信度95% ，已经有足够代表性。

2　试剂因素
    试剂选择、处理、保存不当，可能会影响到抗体监测的结果。为了保证抗体监测的准确性，要做好以下工作：第1，严格选择选择血红细胞，以猪为例，必须以表现出典型病例猪的为抽取对象。第2，严格处理血红细胞，取出的血红细胞要经过稀释、离心洗涤等环节，将血红细胞表层的澄清液以及细胞膜清除干净，否则很有可能会影响到血凝试验和血凝抑制试验，导致红细胞不沉淀，洗涤好的红细胞要严格存贮妥当。第3，严格存储办法。合理控制贮存温度，存在于血清、组织培养上清液或腹水中的抗体在-20 ℃下能够长期储存。低温存放不会损伤抗体活性。抗体的工作液通常储存于4 ℃中。此温度下，抗体的活性能稳定数月至数年亦不损失。抗体溶液不应反复冻融，因为反复冻融将导致部分抗体失活并产生不需要的蛋白—蛋白凝聚物。抗体的凝聚能导致活性丧失。这是由于抗原结合位点的空间构象被破坏，或由于产生的不溶物被离心或过滤而除去。冷凝蛋白类的抗体不能存放于4 ℃。因为在4 ℃下此类抗体会发生沉淀。一些鼠源性IgG3亚类的抗体有此特性。如果抗体在4 ℃下发生沉淀，就应该存放于室温下的叠氮钠溶液中。合理控制储存时间，抗体相当稳定，如果能严密封口防止挥发，它们能存放于4 ℃下达数月而不损失活性。曾有报道，储存于-20 ℃的抗体其活性保持达几十年。

3　实验室操作条件
    实验室操作对重大动物疫病抗体监测的影响也较为明显，主要是体现在实验室环境方面，具体包括温度影响、湿度影响等等。温度对于抗体、抗原、红细胞等活性影响也是相当明显的，高温环境下可破坏细胞表面的凝聚素、温度过低可导致不凝聚，都会影响到监测的准确性。试验证明，抗体监测的适宜温度应该控制在21℃～27℃为适宜。
    就湿度影响而言，湿度指的是实验过程中实验室空气中含有的水分，按照每立方米空气中实际含水量表示时称为绝对湿度。空气中含水占同等温度下饱和含水量的百分比值称为相对湿度。实际影响抗体监测结果的是相对湿度，一般来说，实验室温度越高，饱和含水量也就会多。
    此外，重大动物疫病抗体监测必须要在适合浓度条件下，才能出现明显的反应现象。而在高温高湿环境下，对于抗体监测浓度的控制本身就是一种巨大的挑战。根据国家监测标准规定，动物抗体监测的相对湿度应该控制在40% ～70% ，但实际操作还要严格根据动物的生理需求进行适当地调整。

4　实验室所用设备
    实验室所用设备对于重大动物疫病抗体的监测结果也会产生影响。第1，所用仪器精确度是否准确，是否是在测量仪器测量范围内使用。第2，所用仪器是否完整，有无残缺。如，在使用移液器进行取样时，要详细观察移液器吸头和吸嘴是否吻合，存不存在漏气的问题。尤其是在多次移液过程中，每次移液取量是否一致，否则，很可能会出现“跳孔现象”。第3，严格检查使用仪器的清洁程度，保证洁净无异物。以鸡重大疫病抗体检测为例，监测前，无论是使用微量板，还是使用加样槽，都必须要经过严格清洗，并经过充分拍干、晾干之后，才能用于监测试验。否则，在冲洗过程中残留的自凝因子很容易残留仪器表面，造成监测结果的不准确。
    除了上述所阐述的样本因素、试剂影响因素、实验室操作条件、实验室所用设备情况等4方面影响因素之外，基层养殖户对免疫抗体监测工作的认识不够，对抗体监测工作不支持，存在强烈的抵触情绪，样本取样困难；基层单位工作负担加重，疲于开展抗体监测工作；开展抗体监测的经费不足等问题的存在，也都在一定程度上制约着重大动物疫病抗体监测工作的开展。总的来说，提高重大动物疫病抗体监测工作质量，保证重大动物疫病抗体监测工作的顺利开展，是一项系统工程，源自于社会各界的共同努力。

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