江苏徐州地区鸡场鸡白血病流行调查分析

刘胜宇 韩方伟 戚磊 江苏省徐州市动物疫病预防控制中心

    2012年 7 月至 2013 年 10 月在江苏徐州地区，分别采集 18 个鸡场共计 1800 份样品进行 p27 抗原及禽白血病 A/ B 亚型抗体的检测。结果显示， 所检各鸡场都存在着不同程度的禽白血病感染， A/ B 亚型禽白血病在徐州地区鸡场内普遍存在。

1 试验材料
试剂为禽白血病 p27 抗原酶联免疫吸附剂（ELISA） 检测试剂盒，禽白血病 A/ B 亚群抗体ELISA 检测试剂盒。在江苏徐州地区选取 10 个蛋鸡场和 8 个肉鸡场， 每场分别采集 50 份泄殖腔面试子进行 p27 抗原检测， 同时采集血清进行 ALV-A/ B 抗体检测。10 个海兰褐蛋鸡场中 D1~D5蛋鸡场试验鸡的日龄为 45 日龄， D6~D10为 140 日龄， 8 个肉鸡场R1~R8均为 30 日龄的白羽肉鸡。具体结果见表 1。

2 试验方法与结果
    p27 抗原的检测。 泄殖腔试子加到 1 毫升样品稀释液中冷冻保存， 检测前恢复至 20℃， 待杂质沉淀后取 100 微升上清液加入已包被 p27 抗体的 ELISA 反应板。在已包被 p27 抗体的 ELISA 反应板中分别加入 100 微升阴性对照和阳性对照各 2 孔。盖好反应板 25℃孵育 60 分钟， 弃去各孔液体， 用去离子水洗涤板孔 （350 微升 /孔）， 重复 4 次， 最后一次将液体拍干。每孔加 100 微升酶标抗体。盖好反应板， 25℃孵育 60 分钟，用去离子水洗涤板孔 （350 微升 /孔）， 重复 4 次， 最后一次将液体拍干。 每孔加 100 微升 TM B 底物液， 盖好反应板， 25℃孵育 15 分钟， 每孔加 100 微升终止液终止反应。酶标仪测各孔 650 纳米波长吸光值 （A650）。
    结果判定。阳性对照平均值 （PCX）减去阴性对照平均值 （NCX） 应大于 2. 0， NCX 应小于或等于0. 15 试验方有效。被检样品抗原的相对含量用样品与阳性对照比值 （S/ P）表示， 如 S/ P 小于等于 2. 0， 样品判为阴性， 如 S/ P 值大于 2. 0 判为阳性。A/ B 抗体的检测。ELISA 反应板中分别加入 100微升阴性对照和阳性对照各两孔。按试剂盒要求将待检血清做 500 倍稀释， 在 ELISA 板上每孔加入 100微升稀释后的血清。25℃孵育 30 分钟， 弃去各孔液体，用去离子水洗涤板孔 （350 微升 /孔），重复 4次， 最后一次将液体拍干。每孔加 100 微升酶标羊抗鸡抗体。25℃孵育 30 分钟， 弃去各孔液体， 用去离子水洗涤板孔 （350 微升 /孔）， 重复 4 次， 最后一次将液体拍干。每孔加 100 微升 TM B 底物液， 25℃孵育15 分钟， 每孔加 100 微升终止液终止反应。 酶标仪测各孔 650 纳米波长吸光值 （A650）。
    结果判定。 PCX 减去 NCX 应大于 0. 075， NCX 应小于或等于 0. 15 试验方有效。被检样品抗原的相对含量用样品与 S/ P 表示， 如 S/ P 小于等于 0. 40， 样品判为阴性， 如 S/ P 值大于 0. 40 判为阳性。

3 讨论
    从此次调查结果来看， 18 个场全部检出了 p27抗原及禽白血病 -A/ B 抗体， 说明禽白血病在徐州地区鸡群中普遍存在。由于本病主要是由种鸡通过鸡蛋向下一代垂直传播，祖代鸡场的感染将会直接传给父母代及商品代鸡场， 并逐代放大， 且目前对本病没有可以利用的疫苗和有效的药物防治，所以控制该病主要采取对鸡群进行禽白血病的检测，淘汰带毒的种鸡， 不断净化达到纯洁种群的目的。

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