猪肺炎支原体（MHYO）的血清学诊断方式
熊炜 四川农业大学
目前兽医用于EP诊断的血清学试验包括凝集试验、放射免疫扩散测定试验、间接血凝试验、补体结合试验和酶联免疫吸附试验等，以间接血凝试验(IHA)、补体结合试验(CFT)和酶联免疫吸附试验(ELlsA)更为理想。
1.间接血凝试验
IHA是诊断EP常用方法之一，具有一定的特异性和敏感性。Dowdle等最先用IHA进行MHYO抗体检测，但猪血清会使绵羊红细胞破裂而产生溶血。Lam等用猪的红细胞替代绵羊红细胞，虽然不易发生溶血现象，但效价比用绵羊红细胞低。由于血清易使红细胞溶血，个体差异的存在使红细胞的制备不易标准化，不易操作等缺点，IHA的临床应用受到一定的限制。
2.补体结合试验
CFT也是检测猪血清中MHYO抗体的有效方法之一，包括微量修正补体试验和微管补体试验。早在1983年，日本已将cFT作为常规手段检测MHYO抗体。在对自然感染猪和实验接种猪进行检测时，CFT阳性率与猪肺部病变的相关性良好，但仍存在着很高的假阴性和假阳性。Lloyd等认为，循环抗原的存在是假阴性出现的原因，假阳性的出现是由于与其它支原体发生交叉反应。此外，CFT不能确定猪在4-9周龄的感染情况。虽然cFT在特异性和敏感性方面有一定的局限性，如综合运用临床和组织病理诊断，CFT仍是诊断MHYO感染的有效手段。
3.酶联免疫吸附试验
ELISA是现在最常用于EP诊断的方法之一，它具有敏感性高、特异性强和能进行定量分析等特点。Bruggmalm等首次建立了用于MHYO抗体检测的间接ELIsA，该法敏感性高，但与猪的其他支原体存在交叉反应[62J。Nicolet等改用Tween-20提取蛋白作为抗原，建立间接ELISA检测MHYO抗体，此法特异性更高，但与絮状支原体存在交叉反应。Bereite:等通过改进Tween一 20ELIsA降低了与絮状支原体交叉反应。Futo等克隆表达P46基因，提纯重组的P46蛋白作为抗原建立ELlsA，该方法与其它猪支原体没有交叉反应。Feld等建立了一种单克隆抗体阻断ELlsA，该方法可通过单个抗原决定簇检测MHYo抗体。随后，Potier等用MHYO种特异性的40ku膜蛋白作抗原，建立了单克隆抗体阻断ELISA，该法与猪鼻支原体和絮状支原体没有交叉反应。1987年，Mori等用Tween-20溶解的抗原和抗 MHYoP46蛋白的单克隆抗体建立双夹心ELIsA以检测抗MHYo的抗体。Futo等研究表明，在E.oli中表达的重组P46蛋白，可用于建立特异性ELISA检测MHYO抗体。
Okada等以纯化的抗猪肺炎支原体P46蛋白的单克隆抗体和在E.coli中表达的重组P46蛋白抗原建立了一种双夹心ELISA，临床检测结果表明，这种新的双夹心ELIsA可以取代现在用于诊断EP的cFT。Feng等 (2010)使用在大肠杆菌中表达的 MHYoP97RI作为抗原，建立了一种用于MHYo分泌型lgA抗体检测的间接ELISA(slgA一ELIsA)，用廿CR和商品化的 MHYOIgG一ELISA检测试剂盒对该法进行了验证。和n一PcR相比， SlgA一ELlsA检测的灵敏度为97.0%，特异性为94.4%，准确性为95.8%。重复性试验结果表明，变异系数小于10%。该方法可用于MHYO感染的大范围调查。
上一篇： 猪支原体肺炎的免疫途径
下一篇： "以养为主"成气候 ——广西钦州渔业养殖跨越发展纪实
