２０１３年３月，贵州省某肉鹅饲养场引进３００羽雏鹅，３日龄雏鹅发病，表现为精神委顿，离群独偶，鼻孔流出浆液性鼻液，患鹅频频摇头，拉灰黄色或黄绿色稀粪，神经紊乱。至５日龄，共死亡雏鹅５８羽。

２　流行特点　

     小鹅瘟在自然条件下仅感染雏鹅，潜伏期３～４ｄ，发病后数日内波及全群，死亡率最高可达１００％。最早１～４日龄开始发病，随着日龄的增长易感性下降，２０日龄以上很少发病。本病通过污染的饲料、饮水、用具和环境经消化道传播，也可经污染的种蛋垂直传播。

　　

     临床症状可分为最急性型、急性型和亚急性型。最急性型通常发生在１周龄内的雏鹅，常无临床症状突然死亡，或发现精神委顿后数小时死亡，此型传播迅速，数小时内波及全群，致死率高达９５％～１００％。急性型病鹅离群站立，不饮不食，临死前出现神经症状，颈部扭转，两腿麻痹，全身抽搐。亚急性型多发生于流行后期孵化出的雏鹅或１５日龄以上的雏鹅，表现为不愿走动、减食或不食、腹泻，症状较轻，病程也较长。

     病死鹅腺胃肿胀、嗉囊肿大，心外膜出血、心耳充血，肝脏暗黄，肠道栓塞（图１）。图１　疑似小鹅瘟引起的器官病变

　　

     无菌采集刚病死鹅的肝脏置冰瓶中，立即送实验室进行诊断。

     ５．２．１　主要试剂：Ｔａｑ　ＤＮＡ聚合酶购自ＴａＫａＲａ公司，ＳＤＳ、蛋白酶Ｋ、ｄＮＴＰｓ、ＧｏｌｄＶｉｅｗ　Ｉ型核酸染色剂、ＤＬ２０００、Ｔｒｉｓ、ＥＤＴＡ等均购自天根生化科技（北京）有限公司，苯酚、氯仿、无水乙醇等为国产试剂。

     ５．２．２　模板的制备：取病变典型的雏鹅肝脏材料，按１∶５的比例加入生理盐水研磨成组织匀浆，１０　０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，取上清液按ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取病料的ＤＮＡ。

     ５．２．３　ＰＣＲ扩增：根据ＧｅｎＢａｎｋ中的小鹅瘟病毒ＶＰ３基因，应用ＤＮＡＳｔａｒ软件，设计１对引物用于扩增小鹅瘟病毒ＶＰ３基因片段，目的基因扩增片段长度为５３６ｂｐ。

     上游引物：Ｐ１：３’－ＴＡＧＣＡＴＧＴＴ　ＣＧＣＴＣＡＴＴＣ　ＡＣＡ－５’

     下游引物：Ｐ２：３’－ＧＴＡＡＡＧＣＴＣＣＡＡＧＡＡ－ＣＡＴＣＣＡＧＡ－５’

     ５０μＬ　ＰＣＲ反应体系：１０×ＰＣＲ　Ｂｕｆｆｅｒ　５μＬ、ＭｇＣｌ２（２５ｍｍｏｌ／Ｌ）０．５μＬ、ｄＮＴＰｓ（１０ｍｍｏｌ／Ｌ）１μＬ、Ｔａｑ　ＤＮＡ聚合酶（２．５Ｕ／μＬ）１μＬ，上、下游引物各１μＬ；ＤＮＡ模板３μＬ，用双蒸水补足至５０μＬ。ＰＣＲ反应条件：９４℃预变性５ｍｉｎ，９４℃变性３０ｓ，５６℃退火３０ｓ，７２℃延伸４５ｓ，进行３５个循环后，７２℃延伸５ｍｉｎ。ＰＣＲ产物于４℃保存。ＰＣＲ扩增产物的检测：取８μＬ扩增产物加到１０ｇ／Ｌ的琼脂糖凝胶中，电压为９０Ｖ，电流为４０～６０ｍＡ，电泳２５ｍｉｎ左右，然后在凝胶成像仪下观察。

     ５．２．４　ＰＣＲ扩增结果：以基因组ＤＮＡ为模板，小鹅瘟病毒阳性模板和病死鹅肝组织ＤＮＡ均出现５３６ｂｐ左右的单一条带，与预期大小基本一致。

     ６．１　根据上述病死雏鹅的发病情况、临床症状及分子生物学鉴定，判定该鹅场的雏鹅发生的是小鹅瘟。

     ６．２　根据诊断结果，立即对该养鹅场的雏鹅注射小鹅瘟高免血清，并选用敏感性较高的抗菌素药物进行治疗，疫情得到有效控制。

     ６．３　为预防小鹅瘟，种蛋最好在产出后立刻消毒，种蛋入孵前再进行一次消毒。采用新洁尔灭浸泡消毒法。将新洁尔灭配成１∶１　０００的水溶液，种蛋浸泡３ｍｉｎ。同时用软布擦洗蛋壳表面后晾干。

     ６．４　加强饲养管理，鹅场提倡自繁自养，外地购入的种蛋应来自免疫种鹅。购进的雏鹅应隔离饲养２０～２５ｄ，确认无病后才能混群。饲料中应添加多种维生素，尤其是ＶＡ，以减少角质化的发生。

（贵州省新蒲新区新舟镇农业服务中心，肖学明；贵州省畜牧兽医研究所王璇，李干洲）