禽畜感染流感病毒的诊断方法
赵刚 华中农业大学
流感病毒诊断的经典方法为病毒分离鉴定，由于其操作程序繁杂，耗时费力，因此不易普及，血凝(HA)和血凝抑制(Hl)试验是目前世界卫生组织推荐的常规方法，最常用的是常量法和微量法。病毒中和实验(VN)也是一种经典方法，其敏感性比Hl试验强，但在过去很少使用，因为其操作繁琐，耗时费力，近些年随着现代病毒学技术(包括可培养流感病毒的细胞系和病毒滴度快速测定方法)的发展，才获得广泛使用。当前病毒中和实验(VN)作为标准来评价其它新的检测方法。近年来分子生物学技术发展很快，例如PCR酶联免疫分析 (PCR一 EIA)、荧光 pCR、多重 pCR及核酸体外扩增 (NASBA)等技术均已应用于流感病毒的快速诊断中，甚至可以用于强毒或弱毒监测。
1971年瑞典的Engvan等人分别以纤维素和聚丙乙烯试管作为固相载体吸附抗原/抗体，建立了酶联免疫吸附法(En即 meLinkedImmunosrbentAssay，简称ELIsA)。1974年Volle:等人改用聚苯乙烯微量反应板作为固相免疫吸附载体，使ELISA法成得以更为广泛的应用，使得用于抗原定位的酶标记抗体技术发展成为液体标本中微量物质的测定方法，并逐渐成为抗原抗体检测中最为常用的一种方法。ELISA方法主要有3种:间接ELISA法、阻断ELISA法和双抗体夹心 ELISA法，其中间接ELISA法、阻断ELISA法应用于血清学检测抗体，双抗体夹心ELISA法则应用于抗原的检测。由于ELISA方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便、检测迅速和非放射性以及可以批量测定等诸多优点，使得ELISA方法得到了越来越广泛的应用。酶联免疫吸附法也是流感病毒流行病学普查及早期快速诊断的最有效和最实用的方法。
免疫胶体金技术 (ImmuneColloidalgoldteehnique，ICG)就是免疫金标记技术(Immune-goldlabellingteehnique)。自 1971年创立胶体金标一记技术以来，胶体金被引入免疫化学中，现己经发展为一项重要的免疫标记技术。许多学者证实胶体金不仅可以作为探针进行细胞表而和细胞内多糖、蛋白质、多肤，而且还可以对抗原、激素、核酸等生物大分子的精确定位，也可以用于常规的免疫诊断，进行免疫组织化学定位。由于胶体金标记免疫技术具有快捷、准确、特异性强、敏感性高的特点，从而得到广泛应用。
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