阿莫西林仪器分析法的研究进展
边栋 东北农业大学
1 高效液相色谱法的研究进展
常用的检测方法就是利用浓度类型的紫外检测器和荧光检测器。由于多数 β-内酰胺类抗生素没有专一的紫外发色基团，其最大吸收波长一般在 200 nm~235 nm。在这段波长范围内，选择性一般都很差。为减小检测痕量 β-内酰胺类抗生素时背景的干扰，引入了柱前或柱后衍生化技术，通过柱前衍生化反应可以有效地提高紫外检测器检测 β-内酰胺类抗生素残留的灵敏度。
HPLC 方法测定阿莫西林的含量和有关物质，用 C18色谱柱，以乙腈：磷酸盐缓冲液为流动相进行梯度洗脱，检测波长 230 nm。结果显示，阿莫西林在 0.10 mg/mL~0.60 mg/mL 浓度范围内线性关系良好，阿莫西林的平均回收率为 99.4%。方法可靠、简便、准确。
用阿莫西林对照品加校正因子对克拉维酸的含量进行测定，阿莫西林与克拉维酸进样量分别在 0.2178 μg~6.5340 μg（r=1.0000）与 0.0632 μg~1.8974 μg（r=1.0000）范围内与其峰面积呈良好的线性关系，克拉维酸与阿莫西林之间的校正因子 f=1.330，克拉维酸回收率为99.29% （n=9）。将校正因子应用到阿莫西林克拉维酸钾片中进行含量测定是可行的、实用的。
研究固体阿莫西林的降解动力学规律，采用 HPLC 法测定阿莫西林的含量，在恒温恒湿条件下进行加速试验，以获得与温度、湿度相关的动力学参数。结果为阿莫西林遵从一级降解动力学规律。
测定阿莫西林克拉维酸钾分散片中阿莫西林的含量，采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以磷酸盐缓冲液-甲醇（95: 5）为流动相，结果: 阿莫西林在 132 μg/mL~308 μg/mL , 范围内线形良好，平均回收率为 99.8%，RSD 为 0.62%。该方法简便，重现性好，专属性强，为评价该制剂的质量提供了可靠的方法。
2 气相色谱法的研究进展
β-内酰胺类抗生素需要经过复杂的前处理过程才能得到适于气相色谱分离的衍生化产物，目标物质的回收率难以得到保证，因此 GC 已经基本上被液相色谱法所取代。在有报道的 GC，常用的检测器为氮磷检测器。使用氮磷检测器往往可以获得较好的检测限，对生物样品可以达到 3 μg/kg，但是检测器缺乏选择性，会收到来自基体中的含氮物质的干扰。
以顶空气相色谱法测定阿莫西林中有机溶剂残留量的方法，色谱柱为 HP-5 毛细管柱，柱温采取程序升温，检测器温度为 250℃，载气为氮气，流速为 2 mL/min , 分流比为 20:1，结果显示，丙酮、二氯甲烷、三乙胺三种溶媒检测浓度线性范围分别为 15 ppm~494 ppm（r=0.9990）、45 ppm~1500 ppm（r=0.9992）、18 ppm~600 ppm（r=0.9992），平均回收率分别为 94.7%、9 7.6%、9 6.4%， RSD 分别为 1.45%、1.13%、2.50%，本方法简便、结果准确，适用于阿莫西林中有机溶剂残留量的测定。
3 液相色谱串联质谱法的研究进展
串联质谱技术的基本原理：首先将化合物分子被电子轰击，产生碎片离子，选择目标化合物中所具有某一特征的碎片离子，并将其隔离出来（母离子）；然后，使用惰性分子碰撞被隔离出来的母离子，并使其碎裂成若干的小碎片离子（子离子）；最后，对产生的子离子扫描，获得二级质谱图，使其与标准品进行对照，或与质谱库中储存的二级质谱图进行比对，最终确认化合物的结构。
LC-MS/MS 联用的优点非常显著，因为气相色谱只能分离易挥发且不分解的物质，而液相色谱则把分离范围大大拓宽了，生物大分子也能分离，LC 与高选择性、高灵敏度的 MS/MS结合，可对复杂样品进行实时分析，即使在 LC 难分离的情况下，只要通过 MS/MS 对目标化合物进行中性碎片扫描，则可发现并突出混和物中的目标化合物，显著提高信噪比来增强灵敏度。
HPLC/MS/MS 快速测定牛奶中 6 种青霉素类抗生素残留的方法。高效液相色谱 C18柱分离，26 min 内在线梯度洗脱，6 种青霉素类抗生素得到分离，回收率大于 90%，为牛奶中多组分 β-内酰胺类抗生素残留的定性和定量检测提供了重要参考方法（黄百芬等，2007）。HPLC/MS/MS测定猪肉中5种青霉素类药物残留的方法。经检测，回收率在52%～82.8%之间，该方法适用于猪肉组织中β-内酰胺类抗生素残留的检测（范莹莹等，2007）。动物组织中氨苯砜及其代谢产物N-乙酰氨苯砜的液相色谱-电喷雾串联质谱检测方法，采用YMC-PackPro C18反相色谱柱，以碱性乙腈为提取液，以HLB和MCX固相萃取柱为净化柱，乙腈-水为流动相，梯度洗脱，流速0.3 mL/min，以正离子多反应监测模式测定, 同位素内标法定量，进样量15 μL。方法的定量下限为0.5 μg/kg，线性范围为0.5 μg/kg~5.0 μg/kg，加标回收率为92%~103%，相对标准偏差为4.8%~11.0% 。该法具有灵敏、准确等优点，适用于动物组织中氨苯砜及其代谢产物N-乙酰氨苯砜残留的确证检测。
同时测定饲料中8种苯并咪唑类药物（噻苯咪唑、丙硫咪唑、硫苯咪唑、苯硫氧咪唑、氟苯咪唑、甲苯咪唑、丙氧苯唑和三氯苯唑）的液相色谱串联质谱分析方法，饲料样品用酸化乙腈直接提取，提取液用甲酸溶液稀释后进行分析，分析时用XBridgeTMC18色谱柱，以甲酸溶液-乙腈体系进行梯度洗脱，MRM方式测定，基质外标法定量。8种苯并咪唑类药物均在0.02 mg/L~10.0 mg/L范围内呈良好的线性关系，相关系数（r2）均不低于0.990，在饲料样品中的检出限为2.1 μg/kg~63.0 μg/kg。该方法分析单个样品约需30 min，该方法适合饲料中8种苯并咪唑类药物的同时分析。
猪组织中阿莫西林钠的超高效液相色谱-电喷雾串联质谱的测定方法。经乙腈-水（15/2，v/v）溶液脱脂脱蛋白，HLB固相萃取柱净化，乙腈洗脱。超高效液相色谱-质谱测定。本方法研究的阿莫西林钠的线性范围为0.01μg/mL~1μg/mL，线性相关系数0.9992~0.9995；在0.025mg/kg、0.05 mg/kg、0.1 mg/kg的3个添加水平的回收率在65.9±3.49%~73.2±3.95%；相对标准偏差在5.1%~6.5%；各组织的日内变异系数在5.8%~7.8%，日间变异系数在5.1%~12.5%。方法检出限0.01 μg/g，定量限为0.03 μg/g。
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