猪传染性胃肠炎的诊断方法研究进展
肖文 华中农业大学
猪传染性胃肠炎（TGE）在主要在冬季和早春寒冷的季节暴发流行，常呈地方性传播，该病目前仍是引起仔猪死亡的主要原因之一，给养猪业造成了极大危害。因此对猪传染性胃肠炎病毒（TGEv）的检测，是防治该病至关重要的一部分。目前兽医针对TGEV的检测方法主要有病毒的分离与鉴定，电镜技术检测，血清学检测，免疫组化技术检测和PCR技术检测等。
1. 病毒分离鉴定
目前实验室最常用来分离TGEv的细胞系有ST、PK巧和IBRSZ细胞系。上述传代细胞均成功的分离出TGEV。经由消化道感染的猪只在进行病毒的分离与检测时，一般取患病猪的肠内容物或者小肠段进行实验，这是最易分离与检测到TGEV的组织部分。病毒在细胞上产生典型的细胞病变(CPE)有细胞呈现圆形或长形，膨胀如气球状。对于初次进行分离的野毒株，可能不会出现明显的CPE，此时需要通过连续传代后才能出现明显的CPE。为了增加病毒的分离效率，在细胞培养液中添加适量的胰酶或胰蛋白酶以及运用较老的细胞是一种很有效的方法。陈焕春等利用原代猪甲状腺组织培养细胞进行TGEV分离，在盲传九代后出现了稳定的且具有典型的TGEV的CPE，然后再适应PK一巧细胞获得成功。
2. 病毒电镜检测
对TGEV进行电镜检测是常用的方法之一，通过电镜检测表明，在患病猪的肠内容物和粪便中能够检测到TGEV，而且病毒主要分布在胞浆的空泡里和微绒毛间隙中，病毒在微绒毛间的通常呈串球状排列。有研究表明，通过免疫电镜(IEM)能够更敏感的检测出临床样品中或者细胞培养物中的TGEV，它比常规EM检测方法更好，并且IEM还能够进行血清学鉴定。同时IEM检测方法能够更好的区分出TGEV以及检测出其他肠道中 TGEV的存在。
3. 血清学诊断
血清学检测是实验室对TGE最常用的检测方法。血清学检测包括抗原和抗体检测两个方面。其中对病毒抗原的检测包括有免疫组化法及酶联免疫吸附试验(ELISA)等。主要是从仔猪粪便或者肠内容物中检测。若仔猪出现有腹泻，同时通过免疫荧光法(IF)或者免疫免疫过氧化物酶试验方法检测，呈阳性，则基本可以肯定其为TGEV(斯特劳等，2000)。此外，多克隆抗体双夹心ELISA法也广泛应用于病毒抗原的检测。。但由于目前应用在抗原检测中的抗体主要是多克隆抗血清，因此，在检测中常出现稳定性较差且非特异性强，往往给诊断带来误差。
对病毒抗体的检测包括有中和试验、间接荧光抗体试验及ELISA等。其中，中和试验是利用病毒与特异性的抗体相互作用后进行测定，它是病毒血清抗体检测的基础方法。但，由于病毒中和试验的成本高，所需时间长，且操作严格，因此不适合进行大量的临床样本检测。而当前实验室运用最广泛的是ELISA，它具有高灵敏性和特异性。Nelson等比较了两种方法，结果表明ELISA方法敏感性强于中和试验，且得出结果所需时间早于中和试验。
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