猪捷申病毒的诊断方法
刘杉杉 中国农业科学院
兽医在临床诊断猪捷申病的时候须注意与引起神经症状、繁殖障碍的其他病毒如狂犬病毒（RV）、伪狂犬病毒（PRV）、非洲猪瘟病毒（ASFV）、脑心肌炎病毒（EMCV）、猪细小病毒（PPV）、猪乙型脑炎病毒（JEV）、猪繁殖与呼吸综合症病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪圆环病毒 2 型（PCV2）等加以区别。另外，对于有脑炎症状、母猪发生繁殖障碍以及高发病率和死亡率的猪群，可能是 PTV 感染。确诊应进行病毒分离鉴定和血清学检查，同时利用组织学方法作进一步的验证。
1 病毒分离
虽然目前各种检测方法不断涌现，但是病毒分离仍被作为 PTV 检测的标准方法，并在早期PTV 的诊断中发挥了重要作用。具体方法为取初生弱仔、死胎或畸形胎儿的扁桃体、肝、肠、粪便以及脑组织等，制成组织培养用悬液，接种于猪的胚胎、肾、肠或 PK-15 单层细胞，培养 3~6 天，观察细胞病变。初代培养病毒滴度往往较低，难以判定，因此应盲传几代再观察病变或做免疫酶染色。病毒分离的方法虽然可靠，但是需要在实验室进行，费时费力，不利于快速检测。
2 分子生物学诊断
聚合酶链式反应 ( polymerase chain reaction, PCR ) 方法现在已被广泛应用于诊断学中，其最大的优势是对样本的级数扩增：在特异性引物引导之下，能将皮克水平的 DNA 扩增 100 万倍到微克水平，从而达到可检测范围。这种扩增与病毒增殖不同，只是增加无感染性分子的拷贝数，无生物安全问题。因此，RT-PCR 技术具有敏感、特异、快速和安全的特点，对于实验室的早期快速检测和诊断具有重要的意义。Zell 等通过使用三套引物扩增高度保守的 5′非翻译区或相关病毒的多聚基因区以检测所有已知的 PEV 的血清型；Joseph 等建立了一种采用同一套引物能鉴定 PTV 和 PEV-A 病毒的 RT-PCR 方法，并且扩增后 PTV 和 PEVA长度不同；La Rosa 等建立了一种最新的通过扩增 VP1 以区分 PTV 和 PEV-B 病毒的 RT-PCR 方法，并在参考毒株上得到了验证。在此基础上发展起来的荧光定量 PCR 方法，在敏感性上又有所提高，但是荧光定量 PCR 因为对引物的特异性要求高、试验过程中耗材和仪器昂贵以及假阳性现象普遍而受到限制。
3 血清学诊断
捷申病毒的血清学诊断方法有免疫荧光试验（IF）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、斑点酶联免疫吸附试验（Dot- ELISA）及病毒中和试验（VNT）等。目前 IF 和 ELISA 应用最广泛，但由于捷申病毒存在多种血清型，最有权威性的检测方法还是 VNT。其他的检测方法如补体结合试验，虽然更加敏感，但易产生部分血清型的交叉感染。
4 组织学方法
免疫组化可以确定病毒在组织和细胞中的具体位置，具有简单、快速的优点。Yamada 等通过该方法检测 PTV 的分布，发现 PTV 的分布与大脑的病变密切相关，并在肺的细支气管的上皮细胞、肝细胞、扁桃体上皮细胞以及肠肌层的神经丛内发现该病毒。这种组织学方法为该病的确诊提供了进一步的依据。
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