副猪嗜血杆菌的现有诊疗方法
杨显超 南京农业大学
1.血清学诊断
至今已经有多种血清学方法被用于月，占的诊断，包括补体结合试验(CF)，间接血凝试验 (lHA)和酶联免疫吸附试验(ELIsA)等。
Nielsen等在急性感染的临床病例中发现大约一周后出现循环cF抗体，并且各血清型之间存在交叉反应现象。kahashi等进行了一项免疫实验并用cF测定抗体滴度，在二免后19日记录阳性抗体滴度。MiniatS等用超声波破碎的细菌或煮沸的细菌上清作为包被抗原致敏绵羊红细胞以建立IHA，同时以煮沸细菌的上清或经过透析的热酚水提取物如LPS作为包被抗原建立ELISA，结果显示两种检测方法不太稳定且容易出现假阳性结果。
然而，与补体结合试验、ELISA方法进行比较，IHA试验更方便、快捷，凝集图形清晰，易于判定，结果可靠，间接血凝诊断抗原用于检测大批量血清样品的了HPS抗体具有较高的利用价值。oliveira采用劲只5，超声波破碎抗原盐析物建立了ELISA检测方法，该方法能检测出免疫猪的抗体及仔猪母源抗体。该方法对月子客抗体呈明显的凝集反应，而对阴性血清和猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、支气管败血性波氏杆菌血清不出现阳性反应，表明此方法具有良好的特异性。王艳兽医等采用福尔马林灭活得副猪嗜血杆菌全菌作为包被抗原，建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法，该方法具有很高的特异性和重复性，并利用此方法对发病猪场100份血清进行检测，结果阳性检出率为94%，明显高于细菌分离鉴定的结果。
2. 免疫组化法诊断
由于细菌分离鉴定存在某些不足之处，对刀尹万的诊断因此一些学者求助于免疫组化法，利用该技术已从实验性感染的临床病料中检出月尹万，此方法的最大优点是能够从巨噬细胞的胞浆中检测出死的细菌。aquilm等用一种亲和素一生物素复合IHc技术对血清型5型菌株经气管途径接种感染的10只18-21日龄猪进行检测，其中7只表现为中度纤维素性多发性浆膜炎;脑膜和胸膜为感染最为严重的区域;从9只猪种回收到月尹5，，其中有2只仅从气管拭子分离到细菌。接种的猪扁桃体中树突状细胞和巨噬细胞被免疫染色;在损害的支气管、肺泡和间隙性巨噬细胞被强烈地染色;其中有8个样品免疫组化试验呈阳性，在脓性纤维蛋白渗出物的炎症细胞胞浆中可见细菌或游离的细菌;了式只夕只和APP出现了交叉反应，而与其他的细菌未出现交叉反应。
3分子生物学诊断
聚合酶链式反应是20世纪80年代中期发展起来的体外扩增技术，具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点。它可以用设计为群、属、种或者菌株特异性的引物来满足不同的检测要求，在许多细菌学实验室PCR方法己经取代了费工费时的生化鉴定，几个小时即可将细菌鉴定到种。oliveria等160]根据月毕份的 16srRNA的保守序列设计引物建立了一个特异的PCR检测方法，进一步增加了临床样本中检测刀只夕的敏感性，其最低检测浓度为100CFU/mL。此方法不仅能够直接对临床样品进行检测，而且能对死细菌进行检测。然而用叫噪放线杆菌DNA为模板时，扩增出一个弱的条带。叫垛放线杆菌也为上呼吸道的正常菌群，因此建议用全身性采集的样本来进行检测。 YsteinAngen等根据巧株参考菌株的16srDNA序列进行优化建立了一种新的复合 PCR检测方法，该方法设计了3条引物，扩增产物为lo86bp左右的片段。该方法与之前oliveira等建立的PCR方法相比，具有高度的种特异性，能够将副猪嗜血杆菌与叫噪放线杆菌，猪放线杆菌，微小放线杆菌区分开。然而也有其缺点，直接运用于临床样品检测敏感度略低于Oliveira等建立的PCR方法，对细菌纯培养进行检测时其敏感度只有Oliveira方法的1/10。
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