猪肠激酶在禽畜饲料中的添加使用前景
刘龙飞 河北农业大学
由于 EK 识别的酶切位点专一性强，即识别 6 个氨基酸残基组成的多肽序列，同时对切割点羧基端的氨基酸没有特异性要求，所以利用基因工程制备重组融合蛋白时，EK 酶切位点常被用来作为重组融合蛋白的切割位点。用 EK 切割融合蛋白不仅能够确保其它部位的肽键不被破坏，同时切割后所释放的目的多肽具有和野生型完全一致的 N-末端氨基酸序列，因此 EK 作为蛋白表达体系中融合蛋白的切割试剂被广泛利用。
抗菌肽作为畜禽饲料抗菌添加剂具有良好的畜牧应用前景。由于抗菌肽分子量较小，利用酵母或大肠杆菌很难表达这类小分子多肽。然而通过融合基因表达策略可以提高重组抗菌肽的表达水平。近几年本实验室在重组动物抗菌肽方面进行了广泛的研究，为提高抗菌肽在酵母或大肠杆菌中的表达水平，拟采用融合方式或串连体方式表达重组抗菌肽，然后采用的 EK 酶切位点释放出具有生物活性的抗菌肽。利用EK 切割融合蛋白可以保证重组蛋白 N 端的氨基酸不被改变，获得不带任何附加氨基酸的目的蛋白，从而不影响重组蛋白的活性。这就需要大量的肠激酶。目前市售的肠激酶价格昂贵而天然的肠激酶来源有限，并且提取分离的成本高，加之天然提取的肠激酶易被其它蛋白酶污染，造成切割融合蛋白的同时又降解了目的产物，而运用基因工程的方法来生产肠激酶可以弥补这些不足。目前，多见关于牛肠激酶的研究。对猪肠激酶的的研究未见报道。因此，本试验考虑到生产成本、表达量和重组蛋白活性等方面，对猪的肠激酶轻链分别采用了毕赤酵母表达体系和原核表达体系进行了表达。
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