猪胸膜肺炎放线杆菌ApxIA亚单位疫苗的研究
徐国华 南京农业大学
APP的血清型较多，共有15型，我国目前发现的有l、2、3、4、5、6、7、8、9、10型等几种，常发的优势血清型为1、5、7型。国内兽医控制本病的主要手段是采取灭活疫苗进行预防接种，但是有报道表明灭活疫苗的作用范围仅限本血清型，对其他血清型并不能产生很好的交叉保护性。因此大大限制了灭活疫苗的应用效果。雷连成等研究显示只有活菌疫苗才能对本病产生较好的交叉保护性，而死菌则没有交叉保护性，这很可能是因为APP活菌体内存在某些表达的重要保护性抗原成分，而体外培养后制成的灭活疫苗缺失这样的抗原成分，不能起到良好的免疫保护作用。提示寻找各型特异的毒力基因，开发真正包含各型有效保护基因的多价基因工程疫苗，是一个重要的研究方向。
本试验最终选择APxl毒素作为研究对象是因为Apxl基因是APP最强的毒力基因，目前发现APP至少分泌4种不同的APx毒素，其中Apxl的毒性最强[s1，分泌APxl的血清型1、5、9、10、11型的毒力在妙P各个血清型中也是最强的，它们也往往导致传染性胸膜肺炎的急性爆发。因此理论上可以推断，Apxl的抗原性是最高的，由它制成的亚单位疫苗的效果也将是最好的。另外，国内的常发型为1、5、7等几个，大部分都分泌APxl，因此选择APxl也更适用。
Apxl操纵子是由四部分构成的，分别是激活基因Apx工c、结构毒素基因 APxIA、分泌必需基因 APxIB和 APxID，顺序是APx卜CABD。其中 APxIA基因编码毒素结构蛋白，该蛋白N端含有3个疏水功能区，C端为甘氨酸含量丰富的九肤串联重复功能区，是毒素发挥活性所必需的。seah等对 APxIA毒素蛋白N端疏水区的原核表达产物免疫原性分析显示，可对攻毒小鼠提供较好的免疫保护。
徐福洲等通过研究APx工A的N端和c端的免疫原性的差异，发现N端表达产物的免疫活性显著高于c端，对小鼠的保护力达到60%一70%，这与Bhatia等报道的利用提纯的APx毒素作为免疫原免疫小鼠的保护力相当。进一步证实了 APxIA毒素蛋白的N端在免疫保护活性中的重要作用。
因此，本试验选择扩增APx工A毒素基因的N端960bp大小的片段，经过weste扭blotting分析、抗体动态效价测定以及免疫保护试验结果，充分显示了其优秀的免疫原性。综合上述结果，可以证明APx工A是APP最重要毒力蛋白。而且理论上 APxIA具有良好的交叉保护性，为国内APP基因工程亚单位疫苗的研制提供参考。
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