猪肺炎支原体主要免疫原蛋白
马丰英 华中农业大学
猪肺炎支原体主要有以下几种免疫原:三种膜蛋白即P46、p65和p70，胞内具乳酸脱氢酶活性的蛋白p36以及粘附素主要为p97。
1细胞质蛋白
P36蛋白在不同的猪肺炎支原体分离菌株中具有高度的保守性。Strasser等报道，p36基因在猪肺炎支原体进化过程中是高度保守而特异的，通过p36基因与已知基因和蛋白数据库基因推导的氨基酸序列进行比较分析，证明p36蛋白具有L乳酸脱氢酶(LDH)活性，并能诱导试验和自然感染猪的早期免疫应答。从而证明p36是一种免疫原蛋白，重组p36蛋白或其抗体与絮状支原体和猪鼻支原体的蛋白无免疫学交叉反应。Haldim~等发现，p36蛋白是种L一乳酸脱氢酶，且与细菌的LDH同源性很高。将LDH及其氨基酸序列与已知序列进行比较可发现，LDH为单顺反子编码。但caronJ等采用p36重组蛋白建立的间接ELIsA方法来检测试验以及自然感染猪血清中的抗体，却发现抗体水平与临床病理变化不存在相关性。然而将p36蛋白的单克隆抗体用于间接免疫荧光试验，可以检测试验感染猪的冷冻肺切片中的猪肺炎支原体。
2膜蛋白
猪肺炎支原体的抗原性主要来自细胞膜。张淑改等利用SDS一PAGE电泳分离膜蛋白，发现三种免疫优势蛋白:p46、p65和p74。
2.1p46蛋白
WiseKS等发现，p46蛋白具有种属特异性，在猪肺炎支原体感染早期可检到抗p46的抗体。邵国青等发现，J株与165弱毒株p46基因的同源性可高达96%。Fut0S等将p46基因克隆载体并转入大肠杆菌进行原核表达，纯化重组蛋白用于检测猪肺炎支原体抗体的ELISA实验，结果证实其与絮状支原体、猪鼻支原体以及猪滑液支原体不存在交叉反应。将p46和p65基因原核表达产物复性后免疫小鼠，制备相应单克隆抗体，并研究其交叉反应，结果证实该蛋白具有很高种间保守性和特异性。FreyJ等则通过采用重组p46蛋白制备的单克隆抗体，建立了检测猪肺炎支原体的ELISA方法，效果较好。
2.2P65蛋白
KimMF等的研究表明，p65蛋白是猪肺炎支原体的一个重要免疫原，抗原区主要位于C端。P65蛋白还是一种解脂酶，是猪肺炎支原体主要具免疫原性的表面蛋白即膜蛋白之一。其可能具有损害肺组织中表面活性剂的功能，可以触发首次或者急性感染猪肺炎支原体的断奶仔猪和生长猪的早期免疫应答。P65蛋白的序列中也有l个TGA密码子需要进行定点突变才能够在大肠杆菌中得以表达。Bouh将P65蛋白C端基因 (1200bp)克隆到载体并转化大肠杆菌中表达，成功地研制出针对猪肺炎支原体的种特异性表位的单克隆抗体并用于检测猪肺炎支原体的间接ELISA实验。CheikhSaadBouhK等的试验结果证实了P65蛋白具有很高的种间保守性和特异性。
2.3 p74蛋白
P74是猪肺炎支原体一种具有种属特异性的膜蛋白。Feld等用抗猪肺炎支原体P74蛋白的单克隆抗体建立的阻断ELISA检测方法进行检测时发现，只有抗猪肺炎支原体的血清能阻断单克隆抗体的结合。P74蛋白也是猪肺炎支原体的热休克蛋白。
3勃附因子
猪肺炎支原体现已阐明的载附因子共4种，即p97、 p102、J株一个94切蛋白及Pllo，他们Rl和R2区氨基酸重复单元不同。HsuT等发现Rl区变异大，重复基元8一15个不等，而R2区一般3一4个重复。
3.1P97
P97豁附因子是Zhang等利用单克隆抗体FZGS发现的。Hsu等发现，p97的RI区是主要的抗原决定簇，能直接参与勃附并独立发挥勃附功能。Young等报道，p97蛋白产生的IgA和IgM抗体比其它抗原的能早出现35一60大。Thacker等也发现了这一点。但是另有研究表明，用沙门氏菌或丹毒丝菌为载体表达p97的Rl区基因，免疫动物后，血清检测不到针对p97的抗体，但能产生细胞免疫。eonceicao等将由p97的Rl区和致病性大肠杆菌的不耐热肠毒素B亚单位(LTB)所组成的亚单位疫苗免疫小鼠后，可经鼻粘膜免疫激发Thl型免疫反应及干扰素的分泌，并可检到较高水平抗Rl区的勃膜抗体以及血清抗体。
3.2P102
Hsu等发现，p97基因位于一个双基因操纵元内，其下游 20bp处有一个开放阅读框编码102.3。因pl02蛋白序列中有l个跨膜区，推测其可能是一种膜蛋白。P102在猪肺炎支原体感染期间虽然也产生抗体，但是与已知勃附因子的序列并无显著同源性。研究发现，p1OZ基因存在至少4个拷贝，但P97基因以单拷贝的形式存在。 ojordjevicSP等的研究表明，P102与P97是同源共生基因，可与猪支原体肺炎康复猪的血清发生反应，扫描电子显微镜下可见其在支原体致病过程中表达，由此可推测p102具有潜在吸附纤毛的能力或辅助p97细胞勃附作用，与猪肺炎支原体致病性相关。
3.3PllO
Pllo蛋白是继p97之后发现的又一种纤毛载着素蛋白。chen等报道， p110是一种糖蛋白而不是脂蛋白。吸附抑制试验表明，pllo能抑制猪肺炎支原体对纤毛的戮附。
4核普酸还原酶
Fagan等发现一个与猪的猪肺炎支原体高免血清反应的克隆子，合成插入片断为HkD的多肤与原核生物NrdF的R2亚基c末端具同源性。Fagan等将此编码nkD多肤的核酸片段克隆到沙门氏菌表达系统中，表达15kD的杂合蛋白，其抗血清抑制猪肺炎支原体的生长。小鼠口服该重组菌制成的活疫苗后，肺部粘膜分泌的以及血清中的抗重组NrdF的IgA和lgG明显增加。还发现注射重组蛋白比单用杂合蛋白免疫小鼠的IgG效果更为显著。AustenYChen等将NrdF插到不同的沙门氏菌表达系统，并对口服小鼠的免疫效果进行比较，发现均生细胞免疫，但因载体不同而效果不等。
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