茹仙古丽•木明 肖开提 新疆维吾尔自治区卫生监督所 冬不拉提 新疆特斯克县畜牧局

1发病情况及临床症状

    昌吉市某牛场2011年3月中旬起犊牛开始发病，不同日龄的都有，临床症状基本相同，体温在39℃~40℃之间，听诊心律基本正常，呼吸明显加快，听诊肺部呈罗音、湿罗音，有咳嗽症状，鼻液由浆液性到化脓性各阶段都有，食欲不佳，精神沉郁，病程多在5~15d不等。牛场兽医根据以往的经验采取了运用常规抗生素进行抗菌消炎和强心补液等治疗方法，后期换用几种较好的抗生素，但治疗效果都不佳，有7头犊牛先后死亡。剖检死亡犊牛都有肺脏与胸腔粘连，肺部有大小不等钙化灶，肝脏色黄质脆，心脏病变不明显，消化道正常，笔者对送检病料进行了实验室诊断，通过病原菌分离、培养及生化鉴定，结合流行病学、临床症状，确诊为肺炎链球菌和沙门氏杆菌混合感染。

2细菌学鉴定

2.1镜检

    在无菌环境中取病料各脏器作触片固定后，进行革兰氏染色镜检。

2.2细菌的分离培养

    无菌取病料各脏器，接种于普通肉汤培养基和厌氧肝汤培养基，37℃培养24h观察并进行镜检，将普通肉汤培养基中的培养物分别接种于普通培养基，麦康凯培养基和鲜血琼脂培养基上经37℃培养24h分离培养，观察培养特性并进行染色镜检，挑区取两个菌株的两个菌落，分别接种于普通肉汤培养基上，37℃培养24h培养，进行纯培养，并备用。

2.3动物试验

    将上述两株菌的纯培养物镜检，按0．2ml／只，分别腹腔注射两组小白鼠(每组两只，16g左右，由新疆医科大学试验动物中心提供)，并设对照组进行观察。

2.4生化实验

    分别取上述两株致病菌在普通琼脂培养物进行氧化酶试验，结果都为阴性。将两株培养物分别接种于ATBEXPESSION(细菌自动鉴定及药敏测试仪)RapidID32STREP快速链球菌鉴定试条上37℃培养4h和ID32ENG试条上37℃培养24h。

2.5血清型鉴定

    用沙门氏菌属诊断血清(中国生物技术集团公司兰州生物制品研究所提供，国药准字S10820102)进行进行血清型鉴定。

2.6药敏试验 

    取上述两株革兰氏阴性致病菌的纯培养物混合作药敏试验(药敏纸片由北京天坛药物生物技术开发公司提供，批号200404)。药敏试验根据美国临床标准委员会（NCCLS）推荐的K—B琼脂法进行，试验所选用药物包括下列抗生素：氨苄西林，阿莫西林/克拉维酸，头胞噻吩，头胞噻肟，庆大霉素，环丙沙星，先锋霉素Ⅵ、复达欣、丁胺卡那霉素、奥复欣、青霉素，链霉素，利福平，复方新诺敏。药敏结果判定标准参照NCCLS手册（2005版）。

3结果

3.1镜检结果

    在组织涂片中可见卵圆形成对或短链状，平面相对，成双排列有明显荚膜的革兰氏阳性菌和直形或略弯，呈单个或成双排列，没有芽孢和荚膜的革兰氏阴性短小杆菌以下简称1号菌株和2号菌株。

3.2细菌的分离培养

    病料经普通培养基37℃培养18~20h后，有凸起、光滑、湿润、半透明、边缘整齐的中等偏大菌落和一些生长不良的细小菌落。在麦康凯培养基上可见中等大小圆整、扁平或突起的半透明湿润菌落和露滴状、帽针头大小，呈桔黄色的菌落。在鲜血琼脂培养基上可见灰白色、不透明、圆而隆起、边缘整齐或不规则、大而湿润但不溶血的菌落和白色、小圆形、表面光滑、边缘整齐，微隆起有β-溶血环菌落。普通肉汤培养基呈均匀混浊液体，对两株菌分别进行革兰氏染色镜检可见同样品镜检中见到的两株菌。

3.3动物试验

    2个试验组4只小鼠均在12~24h内死亡，剖检死亡小鼠，脏器分别涂片，经革兰氏染色镜检，可见与注射培养物相同的细菌，对照小鼠没有死亡。

3.4生化试验

    对分离到的2株细菌的培养物分别接氧化酶测定试验，接种于细菌自动鉴定RapidID32STREP快速链球菌鉴定试条上1号菌株自动鉴定仪读出结果为肺炎链球菌，接种于细菌自动鉴定ID32NG试条上2号菌株自动鉴定仪读出结果为沙门氏菌，它们主要的生化试验指标结果如下表

3.5血清型鉴定

    用沙门氏菌属诊断血清，结果为2号菌株的血清型均为都柏林沙门氏菌（1，9，12<vi>:g,p:--）。

3.6药敏试验

    药敏结果是先锋霉素Ⅵ、复达欣、丁胺卡那霉素、奥复欣效果好，其他药物效果不明显。

4讨论

    沙门氏菌病又名副伤寒（Paratyphoid）,是由沙门氏菌所引起的可以传染给人的动物病，特征为败血症、毒血症或胃肠炎，病畜常常发生腹泻，孕畜一般引起流产。规模场犊牛集中喂养，本病的发病率也高。病畜和带菌畜是本病的传染源。流行因素有以下几点：（1）犊牛没有食入足够量的初乳，断奶太早；（2）长途贩运；（3）畜舍卫生条件不良，过分拥挤；（4）饲料和饮水不足；（5）患有其他内、外、产科病或非致病性病毒病，促使带菌牛发病；（6）对呈现腹泻、发热症状而没有确定其病因的病牛未及时隔离，死牛处理不当，或对新引进的家畜没有隔离检疫；（7）饲料保存不当，被啮齿动物侵入，以及水源保护不当，被病原菌污染；（8）气候聚变，家畜没有适当的棚圈。肺炎链球菌（S.pneumoniae）为人的大叶性肺炎、脑膜炎的病原体，也可致畜的败血病或肺炎。存在于上呼吸道内的肺炎球菌，在集体抵抗力降低时，即可发生内源性感染，亦可发生外源性传染。家畜在产仔季节多发，新生畜容易发生败血病，该牛场本次犊牛发病，可能是犊牛断奶太早，畜舍卫生条件不良，过分拥挤，对呈现腹泻、发热症状而没有确定其病因的病牛未及时隔离，而感染沙门氏菌，沙门氏菌又使犊牛集体抵抗力降低，从而继发感染肺炎链球菌。

    由于治疗沙门氏菌病和肺炎链球菌病的主要治疗药物为呋喃唑铜、青霉素、新霉素、氨比西林和磺胺类药物而上述两种菌对上述药物有较强的耐药性，本实验室的药敏结果是先锋霉素Ⅵ、复达欣、丁胺卡那霉素、奥复欣效果好，其他药物效果不明显，该牛场兽医人员只是盲目的根据经验四环素、头孢类药物进行治疗，而没有开展配合护理和其他支持疗法，使得犊牛的病情加剧。因此，最好根据药敏试验结果选用敏感的抗菌药物进行治疗，避免同一药物连续使用，方可避免一些不必要的损失。