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摘要:为掌握青海牦牛群中牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的感染情况,采用ELISA试剂盒对采集于青海省6个规模牦牛饲养场和11户散养户的559份血清样品进行了BVDV抗体检测。检测结果显示,559份血清样品平均阳性率为36.14%,规模牦牛场平均阳性率为34.19%,散养户平均阳性率为39.42%。表明青海牦牛群中普遍存在BVDV感染,应该引起重视。
牛病毒性腹泻是由牛病毒性腹泻病毒引起牛的一种急性、热性传染病,牛感染BVDV后表现为腹泻、进行性消瘦、脱水,严重的导致死亡。BVDV可以引起免疫耐受和免疫抑制,母畜流产和奶牛产奶量下降,每年都给全球养牛业造成巨大的经济损失。为了掌握青海牦牛中BVDV的感染情况,为青海牦牛BVDV的综合防控提供参考依据,本研究对采集于青海省6个规模牦牛饲养场和11户散养户的559份血清样品进行了ELISA抗体检测。
1 材料和方法
(1)2016年3~12月,采集青海省6个规模牦牛饲养场和11户散养户的血清样品共计559份。牛病毒性腹泻病毒ELISA抗体检测试剂盒为美国IDEXX公司产品;ELx800酶标仪为美国BIOtek公司产品。
(2)检测方法。按照牛病毒性腹泻病毒ELISA抗体检测试剂盒说明书操作,首先在96孔酶标板每个孔加 100μL 样品稀释液,之后检测孔加 25μL 血清样品,阳性对照孔和阴性对照孔各加 25μL 阳性和阴性对照血清,加完后在室温下作用90分钟,之后弃去酶标板液体,每孔加 300μL 洗液洗5次,最后一次洗完拍干。在每个酶标孔加 100μL 酶标抗体,室温下作用30分钟,之后弃去酶标板液体,每孔加 300μL 洗液洗5次,最后一次洗完拍干。每孔加 100μL TMB 底物,室温下避光10分钟显色,之后每孔加 100μL 终止液终止反应,酶标仪在450nm波长读数,记录分析检测结果。
(3)结果判定。按照牛病毒性腹泻病毒ELISA抗体检测试剂盒说明书要求,阴性对照平均值≤0.25,阳性对照平均值 - 阴性对照平均值≥0.15试验结果成立,计算检测血清样品的S/P值。公式为S/P=样品OD值 - 阴性平均OD值 / 阳性平均OD值 - 阴性平均OD值。S/P≥0.3,检测样品为阳性;S/P<0.2,检测样品为阴性;0.2≤S/P<0.3,检测样品为可疑;可疑样品需要重新检测。
2 结果和分析
6个规模养殖场和11户散养户均存在BVDV抗体阳性牛。共计检测559份样品,阳性样品202份,平均阳性率为36.14%。其中,6个规模牦牛场的BVDV血清抗体阳性率最高的为47.27%,最低的为16.67%,平均阳性率为34.19%。11户散养户的BVDV血清抗体阳性率最高的为57.89%,最低的为27.78%,平均阳性率为39.42%。散养户与规模牛场相比,无论是最高阳性率,还是最低阳性率都高于后者,其中散养户的平均阳性率较规模牛场高5.23个百分点。因采集血清样品的牦牛养殖场和散养户牛群均未免疫过BVDV疫苗,该抗体阳性表明均由BVDV野毒感染所致(见表1)。
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