种鸡人工授精技术的操作方法及注意事项

    种鸡人工授精操作技术主要包括种公鸡挑选、种公鸡训练、人工采精、精液管理、输精操作、器具管理等。人工授精过程中主要必备器具包括保温杯、温度计、精液稀释液、采精管、输精枪或输精管、毛巾、医用棉、烤箱、温水。

    1  种公鸡的挑选与训练

    挑选健康、无垂直传播性病原(鸡白痢、禽白血病等)的公鸡。在正式采精前一周对公鸡进行按摩训练，将性反射强、精液品质好的公鸡挑选出来。

    2  人工采精

    2.1  采精准备  

    采精前2h停止喂料，以防采精时公鸡拉出粪便。将保温杯水温调至39~40℃，精液稀释液放入进行预热。

    2.2  采精  

    采用背部按摩法采精。抓鸡人员左手抓住公鸡双腿，右手手臂夹住公鸡，使公鸡尾尖朝上45度，臀部朝向采精人员；采精人员左手大拇指和其余4指自然分开微弯曲，以掌面自公鸡的腰背部向尾部轻快而有节奏地按摩1~2次，左手将尾羽拨向背侧，并用拇指和食指向勃起的交配器轻轻挤压，右手拇指和食指迅速跨掐在泄殖腔上两侧柔软部位并将杯口迅速放在交配器下端承接精液。

    2.3  采精注意事项  

    （1）选取保温性能好的保温杯，保证水温在0.5~1h之间降低不能超过1℃，以确保精液温度从采出到点精的过程中始终保持在39~40℃之间。 （2）抓鸡人员动作要轻而快，不能过于粗暴；采精人员轻抚鸡背1~2次，速度适中，勿用力挤捏。 （3）避免采到透明液和气泡，采出的精液 T应为乳白色， T精液中不能含有血液、粪便、羽毛等污物。每只种公鸡5d采精2~3次，采精不能过于频繁，也不能长时间不采。

    3  精液管理

    3.1  精液保存  

    38~40℃时精子的活力最高，在保证短时间内输完精液的前提下，在此温度范围内，温度越高，精子活力越强，因此，应使水温尽可能保持38-40℃，保证每管精液在采出后20min内用完。

    3.2  精液稀释  

    精液与自配稀释液(配方：100ml生理盐水、5g分析纯葡萄糖、1.5ml新鲜蛋黄液、2g头孢噻肟钠)按照1:1的比例均匀混合。也可以购买质量可靠的商品化稀释液。稀释过程中，用干净的拇指堵住管口，采用“∞”式方法缓慢进行摇匀，至少重复10次以上。

    3.3  精液品质测定  

    （1）精液理化指标：精液为乳白色或浅灰色略带腥味的粘稠状液体，以pH计或pH试纸测量，正常范围为7.0~7.8。各周龄种公鸡精液活力等指标参考标准。

    （2）精子活力检测：在常规显微镜下观察，按0.1~1.0范围的10级评分法估计，鲜精活力要求不低于0.5，稀释精液活力要求不低于0.4。检查活力时要求载玻片和盖玻片都应预热到37℃。使用精子检测分析系统观察时，要进行高倍稀释，一般根据分析软件可计算程度进行100-500倍稀释。稀释液使用生理盐水，检测的活力结果以百分数出现，要求A+B级精子数不低于20%。

    （3）精子密度检测：血细胞计数法  首先以微量加样器取原精液20μL，用生理盐水稀释10倍；其次在血细胞计数板上放一盖玻片，取1滴稀释后精液置于计数板的槽中，靠虹吸作用将精液吸入计数室内；最后在高倍镜下计数5个中方格内的精子总数，将该数乘以500万，即得原精液每毫升的精子数(即精液密度)。①精子检测分析系统测定法：用微量加样器取原精液14μl，用生理盐水稀释500倍，混匀；再将稀释精液滴于专用载玻片上，放置于分析系统的显微镜下点击分析软件计算视野中精子；以此方法连续计算载玻片上4角与中央5个视野，操作完毕后自动显示精子密度等相关精液指标。基本原理同血细胞计数法，只是将其中的人工计数过程利用计算机捕捉精子图像自动计算所代替。②分光光度计法：分光光度计预热20min，选定所需波长470~570nm；根据精液对光的吸收情况，选择合适的灵敏度，使吸光度读数控制在0.2~0.7；轻轻旋动调“0”电位器，使读数表头指针恰好位于透光度为“0”处(此时，比色皿暗箱盖是打开的，光路被切断，光电管不受光照影响)；将盛蒸馏水的比色皿放入比色皿座架中的第一格内，将10倍稀释的精液放在其它格内，把比色皿暗箱盖子轻轻盖上，转动光量调节器，使透光度T=100%，轻轻拉动比色皿座架拉杆，使稀释精液进入光路，此时表头指针所示为精液的吸光度A，根据公式计算精液密度。

    4  输精操作

    4.1  输精  

    翻肛员用右手握住母鸡双腿，稍提起，左手拇指和食指在腹部施以压力，使输卵管外翻。输精员用输精枪或输精管吸取定量稀释精液约0.04ml，沿输卵管口中央进入，感觉无阻力时轻轻插入2~3cm，轻轻下压输精枪或挤压授精滴管，将精液轻轻挤出。同时翻肛人员立即解除左手对鸡腹部的压力，防止精液溢出。精液挤出后不要立即放开挤压，待拔出后再放松。拔出输精枪或输精滴管时，关注输卵管回缩过程，避免带出精液，若有精液，要重复输一次。

    4.2  输精注意事项  

    （1）挑选健康、无垂直传播性病原(鸡白痢、禽白血病等)的产蛋母鸡。在输精前一周把不产蛋的母鸡挑选出来淘汰或放到标记的笼子中。（2）为减少母鸡损伤，输精时间应在15:00~17:00点进行。（3）严格遵循抓鸡顺序，防止漏抓、重抓。 （4）抓鸡人员动作要稳、准、轻、快，防止动作粗暴给鸡带来损伤。 （5）翻肛前需用沾有消毒液的毛巾擦拭手，翻肛时用力不可过大或过小，以输卵管口刚好露出泄殖腔为好；若发现输卵管内有未产出的鸡蛋，可用手挤压出来，或做好标记，待鸡蛋产出后再输精。当天已授精的母鸡勿再翻肛。（6）选用口径适中、管口光滑的输精管，以保证输精量的准确，并防止刮伤输卵管、泄殖腔粘膜。 （7）切勿反复吹吸精液，以免造成精子大量死亡，每输完一只鸡，都应更换输精枪头或用医用棉擦拭输精管口。

    5  器具管理

    每次授精结束后，及时冲洗采精管、输精管；冲洗干净后在170℃下烘烤30min或煮沸30min，也可以用95%的酒精润洗后再用生理盐水冲洗1~2次。灭菌后的采精管、输精管应在无菌条件下保存备用。每次输精结束后将输精用的移液器调整至最大刻度，并每隔一个月安排专业人员对移液器进行校准。温度计每月校正1次。
 
    6  其他需要注意的事项

    授精人员的技术水平直接影响到种公鸡的射精量和精液品质。挑选可靠的采精员，是人工授精工作开展好坏的关键。授精员操作娴熟，掌握采精、输精技术和技巧，动作要轻而敏捷，工作细致认真，严格执行操作规程，才能取得良好的授精效果。同一鸡舍的人工授精人员、操作手法必须固定；采精、输精应有固定的日程、时间，更换人员、操作手法均会引起应激，导致受精率下降。人工授精过程中授精人员要配合默契，以提高采精质量和受精率。挑出的病残鸡身体状况恢复正常后，继续授精，连续授精两次后放回大群中。

    （山东省青岛市畜牧兽医研究所  郝海玉、任景乐；国家蛋鸡产业技术体系青岛综合试验站  王善堂、阮国宏、宋晓娜）

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