仔猪胃肠道是养分消化吸收的重要场所，机体所需要的营养来源必须经过一系列的消化过程，才能透过消化道粘膜进入血液循环，为组织提供能量。胃酸分泌对养分的消化利用具有重要的影响，而胃酸分泌既和仔猪年龄、健康有关，也离不开胃肠激素的调控。仔猪胃中存在多种内分泌细胞，分布在胃黏膜上皮之间，通过产生胃肠激素，对胃酸分泌进行调控，如胃泌素(gastrin)、生长抑素(somatostatin，SS)、胆囊收缩素(cholecystokinin，CCK)、组胺、生长素及乙酰胆碱等，其中gastrin和SS对胃酸分泌尤其重要。质子泵(H+－K+－ATPase)专一性地存在于壁细胞中，是胃酸分泌的关键酶，已被公认是胃酸分泌的分子基础。因此，通过测定胃粘膜中gastrin、SS、CCK和H+－K+－ATPasemＲNA的表达在一定程度上可以反映仔猪胃酸分泌能力。

     二甲酸钾(KDF)是以甲酸与甲酸钾或甲酸与氢氧化钾为原料合成的白色晶体，其在动物肠道内可分离成甲酸及钾离子，具有酸化剂、电解质平衡调节剂、胃肠道微生态平衡调节剂等多种功能，且在机体内安全、无残留、无耐药性等特点。因此，其作为仔猪饲料添加剂运用于生产，对克服早期断乳产生的综合症可发挥独特作用。而人们对于抗生素的争议已久，KDF作为抗生素的替代品在早期断乳仔猪生产中的实际应用效果确也有所报道，但多局限于生产性能方面，本文旨在探讨KDF对断奶仔猪胃酸分泌等方面的作用，为KDF是否能本质上替代抗生素提供参考数据。

     1.1试验动物及采样

     本试验共选用28日龄长白×大白断奶仔猪(体重为5～7kg)180头，按照遗传背景相同、体重接近、公母比例一致的原则随机分成2个处理，每个处理6个重复，每个重复15头仔猪，各处理之间的初始体重差异不显著(P＞0.05)。对照组为基础日粮;试验组在基础日粮中添加1%二甲酸钾(商品名为爱康美，纯度＞95.6%，二氧化硅≤1.5%。爱德康(大连)环保产品有限公司)。基础日粮不含任何抗生素或酸化剂。预饲期为3d，试验期为14d。试验期间猪自由采食和饮水，按常规免疫程序进行预防接种及消毒驱虫，对于试验期间出现的死猪和僵猪，及时淘汰并称重。日粮组成和营养水平见表1。

   

     试验14d结束后，每组分别随机挑选5头公猪，清晨空腹称重，采用颈静脉放血的方法处死，然后立即打开腹腔，迅速取胃称重;去食糜，再次称重。胃食糜取出后，立即测出pH值，然后－20℃保存待用。胃去食糜称重后，分离胃黏膜，立即投入液氮，－80℃保存待用。

     胃食糜pH:采用pH精密酸度计(ThermoScien-tificinSingapore，USA)进行测定。胃黏膜胃蛋白酶活性:按照SB/T10317－1999福林－酚法测定。胃蛋白酶会从变性的酪蛋白中分解产生溶于三氯乙酸的酪氨酸，然后用福林试剂显色，用分光光度法在660nm处测定吸光度值。一个蛋白酶活力单位相当于在规定的条件下(40℃，pH=3)每分钟水解酪蛋白产生1μg酪氨酸。

     胃液乳酸:采用南京建成乳酸试剂盒测定。以NAD+为氢离子受体，LDH催化乳酸脱氢产生丙酮酸，使NAD+转化成NADH。其中PMS递氢使NBT还原为紫色呈色物，呈色物的吸光度在530nm时与乳酸含量成线性关系。

     胃液盐酸:使用胃液酸度滴定法测定。取胃液1mL，加蒸馏水4mL及胃液指示剂(二甲基黄)2滴，用0.1mol/L的NaOH滴定。记录樱桃红色至橘黄色(pH2.8～3.0)初显时的滴定数，可得游离盐酸含量。

     1.3相对定量ＲT－PCＲ

     用TＲIzol(15596－026，Invitrogen，Carlsbad，CA，USA)试剂提取样品的总ＲNA，用QuawellUVspectrophotometerQ3000(QuawellTechnology，Inc．USA)测定总ＲNA的浓度和纯度后，用1.2%琼脂糖－甲醛变性凝胶电泳分离，goldview染色后，用天能3500电泳凝胶成像系统分析ＲNA条带。如果条带清晰，无拖尾现象，且28S和18S条带灰度之比约为2∶1，表明ＲNA无降解，质量可靠，否则该ＲNA样品不能使用，必须重新提取。按照PrimeScriptＲTreagentkitwithgDNAEraser反转录试剂盒(DＲＲ047A，上海皓嘉科技发展有限公司)要求进行反转录，反转录产物用于相对定量ＲT－PCＲ。

     根据GenBank提供的猪gastrin，CCK，SS，H+－K+－ATPase基因cDNA序列分别设计一对特异性引物，引物均由上海生工生物技术有限公司合成。引物参数详见表2。采用18SrＲNA作内标，以校正加样和扩增效率的误差。PCＲ反应体系20μL，包括2μL模板，0.4μL目的基因的前引物，0.4μL目的基因的后引物，10μLSYBＲPremixExTaqTM(2×)，0.4μLＲOXＲeferenceDye(50×)，6.8μL灭菌水。PCＲ反应程序如下:预变性95℃，2min;95℃变性15s，退火30s，72℃延伸30s，进行40个循环;所得的CT值用2－ΔΔCt法［1］统计分析。

     试验所得数据通过Excel初步统计后，采用SPSS16.0统计软件进行t检验以P≤0.05作为差异显著性判断标准。所有数据以平均值±标准误表示。  

                

(1．南京农业大学动物科技学院，夏双双,姚文,邹冰洁;2．上海市农业科学院畜牧兽医研究所，夏双双，邹冰洁，字正浩，陆扬，夏东)