蓝舌病在全球的暴发使得研制出一种快速、高灵敏度和特异性的诊断方法迫在眉睫。本文着重对此病的检测方法进行综述，为更好的研究此病，建立新的检测方法奠定基础。

     蓝舌病是一种历史悠久的传染病。1876年在南非首次报道，随后1952年美国，1977年澳大利亚，1979年中国，80年代南美，1988年南欧和地中海，2006年北欧，陆续暴发此病。详情见表1。

    

     此病具有地域性、季节性和周期性的特点，多发于北纬40°，南纬35°之间的国家。湿热的晚春、夏季、早秋是病的高发期。大约每隔3~4年暴发1次，初发地区死亡率20%~50%，此病再发时，死亡率明显降低，但不同的血清型发时，死亡率却很高。蓝舌病主要感染牛和羊。其中绵羊临床症状较为严重。野生反刍动物马鹿、麋鹿、非洲羚羊等也会感染此病。鹿、轴鹿、梅花鹿、狍以及圈养牦牛也有过报到。

     目前专家认为此病毒有以下几种传播方式：经库蠓属约30种蠓类传播；经胎盘垂直传播；食肉动物之间经口传播；感染公牛经精液传播；弱毒疫苗散毒也可能传播BTV。

     蓝舌病病毒是目前分子量最大的RNA病毒，属于呼肠孤病毒科（Reoviridae）环状病毒属（Orbivirus），蓝舌病病毒亚群（Bluetinguevirussubgroup）。BTV公认至少有24种血清型，基因大小为19218bp，分子量为11.8×10，GC含量为43%。病毒粒子呈20面体无囊膜，直径约70~80nm。双股RNA由10个片段组成，编码7个结构蛋白（VP1-VP7）和4个非结构蛋白（NS1-NS3，NS3a）。衣蛋白有3层：外层由VP2和VP5蛋白组成，VP2决定血清型，与受体结合、血凝以及引导宿主特异性免疫有关。中间由VP7蛋白组成，对血清型的特异性和群特异性起主要作用。内层由VP1、VP3、VP4和VP6蛋白组成，其主要作用是病毒转录和复制。NS1蛋白最为保守，VP2和NS3蛋白变异性最大，每隔10年同源序列发生置换，产生强毒株，此变异性已经得到证实。

     BTV含有血凝素，能够凝集绵羊和人的O型红细胞，可在血液中长期存活。酸和高温能将其灭活。BTV为高效的干扰素诱生剂，注射BTV的小白鼠8h后产生的干扰素达60万IU/mL，比其他任何病毒性或非病毒性诱生剂产生的干扰素都高。

     病毒起初在宿主淋巴结复制，后随血液循环到达血管内皮细胞、巨噬细胞及淋巴细胞并在其内复制，而引发病毒血症。由于前列腺素和血栓素浓度的升高，引起过度炎症反应，导致细胞组织梗死，干扰血管内皮细胞的功能，增加血管通透性，从而导致水肿形成。被感染动物感染初期会产生干扰素，后有体液免疫和细胞免疫应答，减少病毒传播和炎症反应。体液免疫可以保护动物免受蓝舌病毒感染，但抗体在体内干扰BTV感染的机制有待证实。BTV的VP2蛋白可诱导宿主血清型特异性抗体的产生，对同源毒株的再次感染有较好的保护力。

     细胞毒性T淋巴细胞（CTL）和辅助性T淋巴细胞参与细胞免疫。宿主个体和不同宿主间存在CTL作用蛋白靶位的重要变异，特异性交叉反应的CTL，能限制病毒在同型或异型组织中复制，从而抵抗BTV病毒的攻击。

     剖检可见口腔、心脏、皮肤、瘤胃、肌肉和蹄部有出血点和溃疡；皮下组织有胶冻样浸润；肺和脾严重充血水肿；骨骼肌严重变形和坏死。

     通常绵羊临床症状较明显，发热、呼吸急促、鼻内大量浆液性分泌物、嘴和舌头肿大、偶见舌发绀、出血性腹泻及蹄叶炎。怀孕母羊流产、木乃伊胎、产先天脑部发育不良(脑积水、脑囊肿、视网膜发育不良等)的幼畜。羊一般无明显症状或症状较轻。如：体温升高、产奶量下降、头和嘴肿大、鼻周围有分泌物、乳房出现红斑。牛一般为隐性感染，无临床症状。由于BTV与同属鹿出血症病毒（EHDV）有强交叉反应，须与其鉴别诊断。

     根据临床症状、病理剖检诊断后，需进一步实验室诊断确诊。

     样品采集：采集试验动物肝素处理的血液，用来检测BTV特异性抗体。采集脾、淋巴结、脑组织（胎儿的最好）等，用来检测BTV病毒基因。

     病毒分离有3种方法：接种易感动物绵羊；对12日龄鸡胚静脉接种、对6日龄鸡胚卵黄囊接种；接种BHK-21、Vero、KC细胞。接种动物敏感性高，但成本和要求也高。鸡胚静脉接种的敏感性是卵黄膜接种的100倍，但实验周期长。接种敏感细胞操作简单，但敏感性较低于前2种。鸡胚静脉接种和细胞培养结合能提高敏感性，是最佳的病毒分离方法。

     （1）RT-PCR方法根据保守性最强的基因组片段5和较强的片段7设计引物，用来检测24种血清型和拓扑结构。因为选择的片段有较强的保守性，所以不能与其他同属病毒发生交叉反应，但不能检测出所有血清型，且有假阳性，不适合高通量分析。Aradaib等和BiμLins等建立RT-PCR方法用于检测BTV基因的2、3、6、7、10片段。试验结果表明：此方法的敏感性高于病毒分离试验，但需要凝胶电泳鉴定结果，使检测速度减慢。

     （2）荧光定量RT-PCR方法：由美国AppliedBiosystems公司在1996年推出的检测方法。N.LeBlanc等用此方法对24种血清型标准株进行检测。试验结果表明：具有较高的敏感性和特异性，最低检出量为10~100个拷贝数。尹惠琼等根据基因片段7设计引物和探针，对20份样品进行检测。试验结果表明：阳性率95%，最低检出量为101个拷贝数。此方能检测出22个血清型，与EHDV无交叉反应。

     （1）间接ELISA检测：JohannesA.Kramps等利用间接ELISA方法对407个样品检测BTV特异性抗体。试验结果表明：敏感性和特异性分别为98.9%，96.5%。

     M.H.Mars等人用此方法对88个牛奶样品检测。试验结果表明敏感性和特异性分别为96%和100%。（2）竞争ELISA检测：是OIE推荐血清学检测的首选方法，与同属病毒无交叉反应，是检测BTV抗体最敏感的方法，但可疑血清型的抗体不易获得，且试剂盒成本高。花群义等用VP7单克隆抗体建立此方法，对1377个样品进行BTV体检测，同时与琼脂免疫扩散试验（AGID）进行对比。试验结果表明：特异性和敏感性均高于AGID，与同属病毒无交叉反应。FabienneBiteau-CorouLer等人用cELISA试剂盒对147个样品检测。试验结果表明：敏感性35.7%，特异性80%。分子检测方法除上述2种方法外，还有巢式RT-PCR方法，此方法为OIE推荐使用方法之一，灵敏性高和特异性好，操作省时。血清学检测方法除ELISA方法外，还有琼脂凝胶扩散、间接免疫荧光、补体结合试验、病毒中和试验、血凝验等方法。琼脂凝胶扩散也是OIE推荐使用方法之一，具有操作简单，成本低的优点，但特异性和敏感性较低，且与EHDV有交叉反应。cELISA方法是血清学检测最为灵敏的方法，但血清学检测方法没有分子生物学检测方法快速，特异性也稍微逊色，检出限间至少差2个数量级，故分子生物学检测病毒是未来发展趋势。

     目前尚无有效治疗方案，故以疫苗免疫预防为主。现已有灭活和弱毒两种类型疫苗供临床使用。弱毒苗可产生良好的免疫性，但安全性较差可能使重组病毒产生新的特性。灭活苗免疫性效果好，但需重复免疫，加大使用成本。能够在体外高效表达、且记忆性强、能交叉保护的BTV免疫蛋白，是未来疫苗研究热点。

     蓝舌病是一种经库蠓传播的虫媒病，主要感染热带、亚热带和温带地区的牛和羊。其中数细毛羊感染最为严重，有明显的临床症状。此病在全球的暴发有扩大趋势，且血清型种类多，变异快，这就需要一种快速、高通量、敏感性高、特异性好的检测方法，确诊此病。从动物实验到血清学检测方法再到分子生物学检测方法，特异性越来越强，敏感性越来越高，被检样品的局限性越来越小。cELISA是目前敏感性最高的检测抗体的方法，是OIE推荐血清学检测方法的首选。巢式RT-PCR方法敏感性高、特异性好，操作省时，是OIE荐检测病毒的方法之一。随着研究的不断深入，基因芯片检测技术具有高通量、灵敏度高、重复性好、节省样品等优点，有广阔的发展趋势。未来新的高通量、能够快速检出24种血清型的检测方法是研究的热点。

（1.吉林农业大学，王贞钧,王全凯；2.辽宁出入境检验检疫局，刘钊,张雪,栾慎顺；3.四川出入境检验检疫局，孙颖杰；4.大连海洋大学，张小飞）