样品:无菌采集猪肺脏、脾脏、肾脏、淋巴结四种组织各194份。样品均来自于佛山科学技术学院动物医院，为临床疑似病料。

     仪器与试剂:高速冷冻离心机;ABI7500荧PCＲ仪;生物安全柜;研钵;微量可调移液器;猪圆环病毒2型荧光ＲT－PCＲ检测试剂盒，购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司;无ＲNA酶水;其他试剂均为分析纯。

     每份组织分别从三个不同的位置取样约1g，用手术剪剪碎混匀后取0．05g于研磨器中研磨，加入1．5mL生理盐水继续研磨，待匀浆后转至1．5mL灭菌离心管中，8000r/min离心2min，取上清液100μL加于1．5mL灭菌离心管中。

     1)取已处理的样品、阴性对照和阳性对照，分别加入裂解液600μL，充分颠倒混匀，室温下静置3～5min。

     2)将液体吸入吸附柱中(吸附柱要套上收集管，吸取液体时尽量不要吸到悬浮杂质，以免离心时堵塞吸附柱)，13000r/min离心30s。

     3)弃去收集管中液体，加入600μL洗液，然后于13000r/min离心30s。

     4)重复步骤3)。

     5)弃去收集管中液体，13000r/min空柱离心2min，以除去残留的洗涤液。

     6)将吸附柱移入新的1．5mL离心管中，向柱中央加入洗脱液25～50μL，室温静置1min，13000r/min离心30s，离心管中液体即为模板ＲNA。

     

     将以上配制的反应体系充分混匀，然后分装于每个反应管中各18μL，分别取2μL模板DNA加入相应反管中混匀并作好标记。在荧光PCＲ扩增仪上进行以下反应:95℃2min;循环95℃5s，60℃35s(收集荧光信号)，共40次。

     阳性对照Ct值≤30并出现特定的扩增曲线，阴性对照无Ct值并且无特定扩增曲线，试验结果成立;被检样品Ct值≤30并出现特定的扩增曲线为PCV－2阳性;被检样品30＜Ct＜37并出现特定的扩增曲线，需重新取样提DNA，扩增后进行结果判定，如仍是可疑，则判定为阳性;被检样品Ct值≥37时，判定为阴性;对于某些未呈现S型曲线，但背景荧光较高的样品，应为阴性。对来自不同地区的猪进行检测，其结果见表1。     

     将组织器官进行分类检测，其结果见表2。

        

     将采自不同猪群的样品进行检测，结果见表3。

    

     PCV－2主要侵害机体的免疫系统，导致感染猪免疫抑制，降低对其他病原体的抵抗力，从而有利于其他病毒和细菌的继发感染，使病猪的死亡率明显升高，损失极为严重。曹正等采用普通PCＲ的方法对江苏省规模化养殖场的疑似病例进行PCV－2病原监测，其阳性率达到63．44%。吴瑗等人对金华地区疑似病例进行PCV－2病原进行检测，阳性率达到59．8%。本研究从佛山兽医科学技术学院动物医院采集临床组织样品，用荧光PCＲ的方法对其进行检测，发现阳性率高达97．9%。阳性率相对要高很多，可能与所使用的方法有一定的关系，因为荧光PCＲ的灵敏度要比普通PCＲ高很多。调查结果显示PCV－2病毒在广东省的感染率非常高，无论是规模养殖场还是散养户，都普遍存在该病毒的感染，防治形势十分严峻。

     PCV－2常存在于淋巴组织、肺脏、肝脏和肾脏等组织器管中。本研究采集临床病猪的淋巴结、肺脏、肝脏、脾脏等组织器官进行检测。从结果来看，所有的组织中都能够检测到病原，不能看出PCV－2最先感染哪个器官，这可能与样品的来源有关。本研究的样品均采自佛山科学技术学院动物医院，而送到动物医院解剖的病例多半是病的非常严重或即将死亡的，此时病毒已经扩散至全身各个部位，因此不能够看出其感染的先后顺序。

     PCV－2的主要易感动物是猪，各种年龄、不同性别的猪都可以感染，但临床症状不尽相同。常见的PMWS主要发生在哺乳期和育成期，病猪和带毒猪是本病的主要传染源。调查结果显示，保育猪和育肥猪的感染率为100%，哺乳猪的感染率为86．7%。仔猪在哺乳期时，母源抗体水平较高，能够在一定程度上保护仔猪不受病毒的感染。但随着母源抗体的消减，仔猪就容易被病毒感染发病。因此做好免疫措施很重要。

     养殖户对PCV－2病毒的认识不足，不打疫苗是造成该病如此流行的重要因素。各级兽医主管部门和技术人员应当向养殖户普及PCV－D的知识，使养殖户意识到该病毒的危害性，从而自觉地做好该病的免疫工作，这样才能减少该病的传播，减少损失。