一例血管瘤型禽白血病的诊断
禽白血病是由禽白血病病毒（avianleucosisvirus，ALV）引起的家禽多种肿瘤性疾病的总称，主要以造血细胞恶性增生为特征的一类传染病，包括淋巴细胞性白血病、成红细胞性白血病、成髓细胞性白血病、骨髓细胞瘤等。血管瘤型禽白血病是由ALV引起的肿瘤性疾病之一，属于内皮性肿瘤，多为血管内皮细胞增生形成。血管瘤易发于患鸡皮肤或内脏器官的表面，血管瘤破裂后引起流血不止，患病鸡常死于大量失血。2014年笔者通过对某养殖户以血管瘤为临床特征的患鸡进行病理学观察和病原核酸检测，诊断为血管瘤型禽白血病。
1材料
1.1病料来源某养殖户10羽病死鸡。
1.2试剂
分子生物学试剂（SDS、蛋白酶K、酚/氯仿/异戊醇、dNTPs、TagDNA聚合酶、200bpDNAMarker等）购自上海生物工程技术有限公司；酒精、二甲苯、石蜡等。
2内容与方法
2.1病理学观察
选择病变组织及与病变组织交界部位，使用梯度浓度乙醇溶液脱水，将脱水组织浸入二甲苯透明，移入液化石蜡内浸渍，将组织移入包埋框内，倒入石蜡，包埋，切片；石蜡切片苏木素-伊红染色后，显微镜观察。
2.2禽白血病病原核酸鉴定
2.2.1使用引物参照金志强等文献，合成内外两对引物，见表1。以单管巢式PCR方法检测病料外源性禽白血病病毒核酸。
2.2.2PCR扩增取病料总DNA样本1～2μL作为模板，分别加入10×PCRbuffer1μL、25mMMg-Cl23μL、dNTP（10mM）1μL、TaqE（2.5u）1μL、LTR1+LTR2（20mM）各0.5μL，添加ddH2O补足反应体积为10μL。第一次扩增进行15个循环，然后在同一反应管中加入10×PCRbuffer4μl、LTR3+LTR4（20mM）各1μl，添加ddH2O补足反应体积为50μl；第二次扩增进行35个循环。PCR反应按下列条件进行：94℃预变性5min、94℃变性20s、60℃退火40s、72℃延伸1min，最后72℃再延伸10min。PCR扩增完成以后，取5μl扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳检测。
3结果与分析
3.1剖检病变发病鸡主要表现为鸡皮肤表面、胸部皮肤出现血疱，血疱破裂后流血，有些破溃已结痂。部分患鸡肝表面可见多个凸起的血疱。见图1-图2。
3.2病理组织学观察从病例切片中可以看到发生血疱的组织细胞之间含有大量红细胞，肾脏肾小管与肾小管之间出现淋巴细胞，肾间质中存在数量不等的红细胞。见图3。
3.3单管巢式PCR方法检测LTR基因在被检的10份病料中，8份扩增出一条213bp的DNA带，与预期扩增长度相符合，外源性禽白血病病毒的检出率达80%（8/10）。
4体会与讨论
1）从鸡分离的禽白血病病毒有A、B、C、D、E、J六个亚群。其中A、B、C、D属于外源性ALV；E亚群为广泛存在、没有致病性的内源性病毒，参考金志强等方法合成的引物，直接检测出了外源性禽白血病病毒，为快速诊断禽白血病病毒提供了快捷的方法。
2）血管瘤是由禽白血病病毒引起禽白血病的一种临床表现形式，感染禽白血病的鸡群呈渐进性发生和持续性的死亡，蛋鸡群产蛋率下降。通过剖检病变、组织学观察、病原核酸检测，确诊该次疫病为外源性禽白血病病毒引起的血管瘤型禽白血病。
(VeterinaryServiceCenterofPenghu,hediagnosisofhemangiomatypeofavianleukosisChenyie)
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