试验动物:实验鸡选择永靖县盛邦牧业有限责任公司饲养的120日龄京红1号商品代蛋鸡，该批鸡共30000只，30日龄时接种一次重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1，Ｒe－6株+Ｒe－4株)。试验前抽取30只鸡静脉采血进行血凝抑制试验，Ｒe－4株抗原的血凝抑制滴度在3～7.5log2之间，平均为5log2;Ｒe－6株的血凝抑制滴度在3～7log2之间，平均为4.8log2。

     试验疫苗:重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1，Ｒe－6株+Ｒe－4株)，肇庆大华农生物药品有限公生产，批号013198。

     检测试剂:禽流感病毒H5亚型Ｒe－4株和Ｒe－5株抗原、标准阳性血清，均由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所生产，由甘肃省动物疫病预防控制中心统一订购提供;pH7.2的0.01mol/LPBS缓冲液，自配。

     试验分组:该批鸡共分3栋鸡舍饲养，分别采取胸部肌肉、颈部皮下和大腿外侧肌肉注射禽流感疫苗0.5mL，以下分别称为胸组、颈组和腿组。

     血清采集:分别注苗后14d、21d、60d采取各组试验鸡翅静脉采血并分离血清。

     抗体效价检测:按《中华人民共和国国家标准－高致病性禽流感诊断技术》(GB/T18936－2003)进行，血凝抑制滴度以血清稀释倍数倒数的对数(log2)表示。

     各试验组H5N1Ｒe－6株抗体检测结果与Ｒe－4株抗体检测结果相近，在此仅介绍Ｒe－6株检测结果。注苗后各日龄监测结果分别见表1、表2和表3。

  

     从表1中看出，注射禽流感疫苗14d后胸组抗体效价在6～9log2之间，平均7.5log2;颈组抗体效价在7～10log2之间，平均8.5log2;腿组抗体效价在7～10log2之间，平均8.9log2。平均抗体效价腿组＞颈组＞胸组＞注苗前，试验各组与注苗前抗体效价滴度检验差异均极显著(P＜0.01)。试验各组之间抗体效价滴度检验:腿组与颈组抗体效价差异不显著(P＞0.05);腿组与胸组、颈组与胸组抗体效价差异均显著(P＜0.05)。腿组和颈组抗体上升速度快，比胸组高一个滴度以上。

  

     从表2中看出，注苗禽流感后21d胸组抗体效价在7～9log2之间，平均7.8log2;颈组抗体效价在9～11log2之间，平均8.8log2;腿组抗体效价在8～11log2之间，平均9.1log2。平均抗体效价腿组＞颈组＞胸组，试验组之间抗体效价差异不显著，说明各组抗体效价水平基本一致。

  

     从表3中看出，注射禽流感疫苗后60d胸组抗体效价在6～7log2之间，平均6.7log2;颈组抗体效价在6～9log2之间，平均7.3log2;腿组抗体效价在6～10log2之间，平均7.8log2。平均抗体效价腿组＞胸组＞颈组，各组抗体效价滴度检验差异不显著。但是，抗体效价比注苗后21d明显下降，下降了幅度在1.1～1.5个滴度之间。

     注射禽流感后14d腿组、颈组与胸组相比血清抗体上升速度快，平均高达1个滴度以上，这是由于该批鸡40日龄时进行了禽流感灭活疫苗免疫，并且胸部肌肉注射，长期多次在同一个部位注苗会造成局部组织发炎坏死，影响疫苗的吸收，因此抗体上升速度慢。

     注射禽流感后21d、60d试验各组抗体平均滴度差异不显著，说明不同部位均能获得一致的抗体水平。建议在禽流感灭活疫苗免疫中，为了使鸡体迅速产生有效的免疫抗体，不同部位交替免疫注射禽流感疫苗。

(甘肃省永靖县动物疫病预防控制中心，张俊文)