选择奶牛生产疾病早期诊断指标的基本原则是灵敏、特异、简便、实用、价廉。

     １．１　酮病早期诊断技术和方法传统的奶牛酮病诊断主要依赖临床症状和尿、乳酮体的检测。尿、乳酮体检查主要是检测乙酰乙酸，因其化学性质不稳定易于氧化，且含量不如β－羟丁酸（β－ｈｙｄｒｏｘｙｂｕ－ｔｙｒｉｃ　ａｃｉｄ，ＢＨＢＡ）高，以致尿液酮体检查的结果敏感性高但特异性差，存在假阳性；而乳汁酮体检查特异性高但敏感性低，存在假阴性。为弥补尿、乳酮体检查的不足和缺陷，国外研发了检测乳汁ＢＨＢＡ的试纸条，在一定程度上提高了酮病诊断的准确性。２００８年我们实验室研制出检测乳汁ＢＨＢＡ的奶牛亚临床酮病诊断试纸条，特异性、敏感性、重复性和稳定性符合国家标准，达到了国外同类产品的水平，但其价格仅为国外同类产品的１／３，已获国家发明专利授权。

     与尿、乳酮体检查相比，测定血清ＢＨＢＡ诊断酮病的准确性和敏感性更高。近年来，国外兽医临床提出酮病诊断的‘金标准’：ＢＨＢＡ＞１．２ｍｍｏｌ／Ｌ，葡萄糖（Ｇｌｕｃｏｓｅ）＜２．５ｍｍｏｌ／Ｌ。临床酮病血清ＢＨＢＡ＞１．５ｍｍｏｌ／Ｌ，亚临床酮病血清ＢＨＢＡ＝１．２～１．４ｍｍｏｌ／Ｌ。Ｉｗｅｒｓｅｎ等评价了手持电子ＢＨＢＡ测定仪诊断酮病的价值。全血ＢＨＢＡ浓度为１．２、１．４ｍｍｏｌ／Ｌ时，其检测的敏感性分别为８８％和９６％，特异性分别为９６％和９７％，优于２种常用的化学试纸条（Ｋｅｔｏｓｔｉｘ　ａｎｄ　Ｋｅｔｏｌａｃ），但其检测尿液和乳汁的阳性和阴性预测值很低。认为应用电子ＢＨＢＡ测定仪检测全血ＢＨＢＡ可用于亚临床酮病的诊断。

     由于采血检测ＢＨＢＡ在生产实际受到一定限制，寻找新的诊断标志物和建立更便于牛旁检测（ｃｏｗｓｉｄｅ　ｔｅｓｔ）特别是群体诊断的方法和技术是亚临床酮病早期诊断的关键。

     Ｖａｎ　ｄｅｒ　Ｄｒｉｆｔ等采用傅里叶变换红外光谱（ｆｏｕｒｉｅｒ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍ　ｉｎｆｒａｒｅｄ（ＦＴＩＲ）ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）检测乳汁酮体和ＢＨＢＡ浓度，结果表明仅凭乳中酮体和ＢＨＢＡ的浓度诊断酮病价值有限，因有较大比例的假阳性。在整个泌乳期间，乳汁高丙三醇磷酸胆碱（ｇｌｙｃｅｒｏｌｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ，ＧＰＣ）值与低酮病发病率关联。泌乳１个月时，ＧＰＣ／ＰＣ摩尔比等于或大于２．５指示发生酮病的危险性很低。乳汁ＧＰＣ和ＰＣ（ｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ）的浓度可反映降解磷酸胆碱作为脂肪酸来源以满足泌乳早期能量需求增加的能力。也有人提出乳汁柠檬酸盐可能是能量负平衡的生物标志物，但其临床诊断价值还有待进一步确定。迄今为止，尚未有比检测血清ＢＨＢＡ诊断亚临床酮病准确性更高的方法和技术。

     １．２　脂肪肝早期诊断技术和方法　肝组织活检技术是目前奶牛脂肪肝诊断唯一可靠的方法。根据肝组织甘油三酯（ＴＧ）的含量（％湿重）可判断脂肪肝的轻重：ＴＧ含量１％～５％为轻度，５％～１０％为中度，＞１０％为重度。由于肝组织活检属介入性诊断技术很难为奶牛场的管理者所接受，在很大程度上限制了其应用。寻找适合兽医临床需要的非介入性诊断方法和技术已成为奶牛脂肪肝研究的热点。

     可用于脂肪肝检验诊断的血液生化指标主要包括以下几类：①能量代谢指标，如ＮＥＦＡ、ＢＨＢＡ、葡萄糖等；②蛋白代谢指标，如白蛋白、总蛋白、尿素氮（ＢＵＮ）、ＶＬＤＬ等；③肝机能指标，如ＧＧＴ、ＡＳＴ、ＳＤＨ等肝特异性酶，胆红素、胆酸等胆汁流动指标。Ｋａｌａｉｔｚａｋｉｓ等认为血清鸟氨酸氨基转移酶（ｏｒｎｉ－ｔｈｉｎｅ　ｃａｒｂａｍｏｙｌ　ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＯＣＴ）和谷氨酸脱氢酶活性，及ＮＥＦＡ／胆固醇比值是脂肪肝良好的指征。血清ａｐｏＢ－１００，ａｐｏ　Ａ－Ⅰａｎｄ　ａｐｏＣ－Ⅲ浓度降低，卵磷脂胆固醇酰基转移酶（ｌｅｃｉｔｈｉｎ：ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　ａｃｙｌ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＬＣＡＴ）活性降低，及触珠蛋白和血清淀粉样蛋白Ａ浓度增加与脂肪肝和脂肪肝相关疾病的发生密切相关。因此，测定载脂蛋白和酶活性有助于这些疾病的早期诊断。测定血清胆汁酸对脂肪肝的诊断价值不大，因其浓度的变动大。可作为人脂肪肝的标志物有：细胞角蛋白－１８片段（ＣＫ－１８），脂肪细胞脂肪酸结合蛋白（ＡＦＡＢＰ）和成纤维细胞生长因子（ＦＧＦ２１）等。值得指出，这些指标并不是脂肪肝的特异性诊断指标，且在轻、中度脂肪肝病牛未必呈现明显变化，其诊断的敏感性和特异性未必能满足奶牛脂肪肝早期诊断的需要。

     １．３　亚急性瘤胃酸中毒（ＳＡＲＡ）早期诊断技术和方法　ＳＡＲＡ的诊断很困难，一方面是由于发生酸中毒后病牛临床表现不明显；二是ＳＡＲＡ病牛瘤胃ｐＨ值每天只有数小时≤５．８，要建立诊断需连续监测瘤胃ｐＨ值，而多次经胃导管或瘤胃穿刺采集瘤胃液不切合生产实际。目前，诊断ＳＡＲＡ的唯一方法是根据牛群常规的监测和相关疾病发病率的记录，及异常的临床常用参数（ｐａｒａ－ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｐａｒａｍｅ－ｔｅｒｓ）。瘤胃炎、采食量减少、蹄叶炎、真胃变位和真胃溃疡、瘤胃臌气及繁殖障碍等疾病的发病率增加应考虑牛群存在ＳＡＲＡ。监视ＳＡＲＡ的症状，如粪便发亮淡黄色，有甜酸味（ｓｗｅｅｔ－ｓｏｕｒ），有泡沫，含多量未消化纤维和谷物，以及鼻出血，淘汰和死亡率显著增加。监测临床常用参数（ｐａｒａ－ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｐａｒａｍ－ｅｔｅｒｓ），如瘤胃液参数，ｐＨ≤５．８，可诊断为ＳＡＲＡ。ＳＡＲＡ病牛常呈现低产奶量、低乳蛋白、低乳脂。ＳＡＲＡ继发瘤胃炎引起的急性期蛋白反应，如血清淀粉样蛋白Ａ（ａｍｙｌｏｉｄ－Ａ）和血液触珠蛋白（ｈａｐｔｏ－ｇｌｏｂｉｎ）浓度增加，可能作为监测指标。

     近年在连续监测瘤胃ｐＨ值的方法和技术方面有了突破性进展。ＡｌＺａｈａｌ等应用瘤胃无线电遥测球（ｒａｄｉｏｔｅｌｅｍｅｔｒｉｃ　ｒｕｍｉｎａｌ　ｂｏｌｕｓ）观测了瘤胃温度与ｐＨ值的相关性，瘤胃ｐＨ最低值与其相对应的瘤胃温度呈负相关。瘤胃温度有可能预测瘤胃ｐＨ值，而有助于亚急性瘤胃酸中毒的诊断。Ｓａｔｏ等研制出无线传输ｐＨ测定系统（ｒａｄｉｏ　ｔｒａｎｓ－ｍｉｓｓｉｏｎ　ｐＨ　ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ　ｓｙｓｔｅｍ），由无线ｐＨ传感器、数据测量接收器、继电器和配有特殊软件的个人电脑。经瘤胃瘘管将ｐＨ传感器置于瘤胃实时监测瘤胃ｐＨ值的变动。Ｓａｔｏ等通过比较瘤胃和网胃ｐＨ值变化，认为网胃ｐＨ值可用于牛ＳＡＲＡ的诊断。

     １．４　低钙血症的早期诊断指标和方法正常牛血钙维持在２．１～２．５ｍｍｏｌ／Ｌ（８．５～１０ｍｇ／ｄｌ）之间。产后１２～２４ｈ血钙浓度最低。围产期奶牛血钙浓度在２．０～１．３８ｍｍｏｌ／Ｌ（８．０～５．５ｍｇ／ｄｌ）即可诊断为亚临床低钙血症。目前，除血钙尚无其他可用于亚临床低钙血症诊断的指标。

     Ｋａｔｏｈ等提出ａｐｏＣ－Ⅲａｎｄ　ａｐｏＢ－１００可能与乳热的发生有关，测定围产期奶牛血清ａｐｏＣ－Ⅲ浓度有助于乳热的诊断。脂肪肝、酮病、皱胃左方变位、乳热和胎衣不下病牛血清ａｐｏＣ－Ⅲ降低。ａｐｏＣ－Ⅲ降低与产后疾病，尤其乳热密切相关。血清酸性磷酸酶是监测饲喂阴离子盐奶牛钙代谢激活最好的生物标志物。血清脱氧吡啶啉（ｄｅｏｘｙｐｙｒｉｄｉｎ－ｏｌｉｎｅ，ＤＰＤ）和吡啶啉（ｐｙｒｉｄｉｎｏｌｉｎｅ，ＰＹＤ）是监视奶牛骨吸收有用的手段。但上述指标在奶牛亚临床低钙血症诊断的实际价值还有待验证。在寻找奶牛低钙血症早期诊断指标时，可考虑借鉴医学临床研究有关评价骨代谢的相关指标，如Ⅰ型胶原交联羧基末端肽（ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｅｄ　ｃａｒｂｏｘｙ－ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｔｅｌｏｐｅｐ－ｔｉｄｅ　ｏｆ　ｔｙｐｅⅠｃｏｌｌａｇｅｎ，ＩＣＴＰ）、硬化蛋白（ｓｃｌｅｒｏｓ－ｔｉｎ）、耐酒石酸盐碱性磷酸酶（ｔａｒｔｒａｔｅ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔａｃｉｄ　ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＴＲＡＰ）等骨更新（ｂｏｎｅ　ｔｕｒｎ－ｏｖｅｒ）指标；骨碱性磷酸酶、Ⅰ型前胶原羧基末端前肽（ｃａｒｂｏｘｙ－ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｐｒｏｐｅｐｔｉｄｅ　ｏｆ　ｔｙｐｅⅠｐｒｏ－ｃｏｌ－ｌａｇｅｎ，ＰＩＣＰ）、骨钙素（ｏｓｔｅｏｃａｌｃｉｎ）、骨保护素（ＯＰＧ）等骨形成指标。

（吉林大学动物医学学院，刘国文，李心慰，李小兵，王哲）