仔猪口蹄疫母源抗体变化趋势的研究

    口蹄疫（Foot-and-mouthdisease，FMD）是由口蹄疫病毒引起的多种动物的传染病，包括7个主要的血清型。猪口蹄疫以患病猪只的口、蹄部出现水疱性病症为特征的传染性疫病。其特点是起病急、传播极为迅速。国际动物卫生组织（OIE）将该病列在15个A类动物疫病名单之首，我国政府也将其排在一类动物传染病的第1位。随着世界经济的发展，各国间的相互交流日益频繁，再加上现代运输业的快速发展，都增加了口蹄疫预防的难度和复杂度。因此提高口蹄疫检测效率是预防控制甚止消灭该病的关键。科学的免疫程序与饲养管理，加上准确的抗体水平检测方法可以有效控制猪口蹄疫的流行。免疫程序不能盲目套用，需要根据所饲养猪群的抗体水平的消长来确定合理的免疫时间、免疫剂量。经免疫监测，免疫抗体合格率达不到规定要求时，尽快实施一次加强免疫。已经建立和应用的口蹄疫的传统诊断技术有生物学试验、血清学诊断技术，以及用于口蹄疫病毒检测的新技术，如RT-PCR、生物传感器和基因芯片技术。但是，常规的血清学检测方法对猪只的应激很大，尤其是仔猪，容易引起应激综合征。所以，操作简单、对猪群应激小的检测方法越来越被期待。笔者等设计本试验以探索研究唾液法检测仔猪口蹄疫母源抗体水平的可行性。

1　材料与方法
1.1　试验材料
    猪口蹄疫正向间接血凝试验检测试剂盒，PBS液，医用棉棒，注射器，1.5mlEP管，离心机。
1.2　实验对象
    选5窝由健康经产母猪产的第3～5胎仔猪，每窝10头，共50头作为研究对象。
1.3　试验方法
    仔猪的唾液量较少，较难采集，尤其是未断奶仔猪，所以需要用医用棉棒在仔猪口腔内充分沾湿唾液后取出，折去尽量长的木棒或者用镊子直接将棉球与木棒完全分离，将棉球置于1.5ml的EP管内，注入200μlPBS液，使棉球完全浸于PBS液内，贮存待检。
    分别在5、15、25、35、45日龄采集仔猪唾液、血液样品各50份。用注射器于前腔静脉采血，每头猪采集3～5ml，室温静置2～6h，然后将血液样品离心后取血清置于离心管内-20℃保存备检。为了去除唾液中的食物残渣，采集的唾液样品必须先进行预处理，再进行抗体水平检测。将装有唾液样品的离心管放置离心机内，设置2000r/min，离心1min，去除杂质，留取上清。处理好的唾液样品于-20℃保存备检。操作过程严格按照说明书要求。分析总结仔猪母源猪口蹄疫抗体水平的变化趋势，对比分析仔猪血清中母源抗体变化趋势与唾液中母源抗体变化趋势的异同。

2　试验结果
    5日龄仔猪血清法检测50份样品的母源猪口蹄疫平均抗体效价为9.44，唾液中猪口蹄疫的平均效价为4.06；15日龄仔猪血清法检测50份样品的母源猪口蹄疫平均抗体效价为9.2，唾液中猪口蹄疫的平均效价为3.64；25日龄仔猪血清法检测50份样品的母源猪口蹄疫平均抗体效价为8.6，唾液中猪口蹄疫的平均效价为3.64；35日龄仔猪血清法检测50份样品的母源猪口蹄疫平均抗体效价为7.2，唾液中猪口蹄疫的平均效价为2.36；45日龄仔猪血清法检测50份样品的母源猪口蹄疫平均抗体效价为5.64，唾液中猪口蹄疫的平均效价为2.18。详见附表和附图。

3　讨论
    人类的唾液已经得到广泛的应用研究。已经证实，唾液能反映出血清或口腔中的药物、抗体、病毒和其他成分的浓度。在诊断上，唾液比血清具有更多优势。通常情况下，血清检测使用的是机体为应对感染而产生的抗体，如IgG。唾液中同样含有高浓度的其他抗体，如IgM和IgA，它们对诊断十分重要，与IgG相比还可以反映出其他信息。IgA的主要作用是粘膜免疫（发挥作用的部位在组织的粘膜而不是在循环系统中），可用于检测非全身性感染的疾病。IgM是感染后最早产生的抗体，它的存在预示疾病处于发病的早期。能够通过唾液对猪瘟、猪口蹄疫、猪圆环病毒、猪流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征等进行检测，提高了唾液法检测的实用性，因此检测唾液正在成为筛选早期感染的一种切实可行的方法。
    猪群免疫时间的确定需要进行仔猪母源抗体水平的监测，猪场应根据本场猪群抗体水平确定免疫时间，血清法检测猪群口蹄疫抗体水平需要前腔静脉采集血液，对仔猪应激很大，易使仔猪免疫力明显降低，引发疾病。另外仔猪采集完血液后的伤口较难愈合，易感染病菌。但是，相比较采集血液，唾液的采集方法较简单，并且不会给仔猪留下伤口。唾液的处理与保存的方法也比血清法简单。从试验结果可以看出，仔猪血清中母源抗体水平随着日龄的增加呈现明显下降趋势，这与以往的研究结果相符，唾液中抗体水平也呈现出与血清中抗体水平变化相似的趋势。这一研究为未来唾液法的普及应用奠定了基础。

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