动物疫苗中如何做好菌种、毒种选育

赵玲玲 黑龙江省动物卫生监督所

    菌种和毒种是动物疫苗生产、检验与研究的基础。自然界存在着多种多样的微生物， 而且还在不断地出现新的株和型， 由于生物制品用途的不同， 所选择的菌种和毒种也各异。

1 兽医生物制品菌 （毒）种标准生物制品用强弱菌 （毒）种除毒力标准不同外，还需符合以下标准：
①历史清楚， 流行地区、 动物种毒、 流行资料清楚， 分离鉴定资料完整， 传代、 保藏、生物特性检查方法明确。
②生物性状明显，菌种形态、 培养特征和生化特性、 血清免疫学特性明显， 菌毒种人工感染动物后临床表现， 病理变化特征明显。
③遗传学上相对均一与稳定。菌毒种遗传性状的改变主要表现在形态特征， 毒力和反应原性等方面。提高或保持菌毒种均一性和稳定性的方法，就是经常进行挑选、 纯化。
④反应原性与免疫原性优良。反应原性高，即使微量抗原进入机体即能产生强烈的免疫反应， 在血清学上会出现很高的特异性。优良的免疫原性物质能使免疫动物发生尽可能完善的免疫应答，从而获得坚强的免疫力。
⑤毒力应在规定范围内。用于制造弱毒疫苗的毒种毒力， 要尽可能弱性，而其他制品用的则要强毒力毒种，但抗原性要尽可能高为准， 强毒株细菌的毒性物质还含有毒素物质，在未处理前的毒力极强， 对动物是不安全的， 所以必要对致病力进行测定。

2 强菌 （毒）种选育
强菌毒种广泛用于诊断制品， 抗病血清， 灭活疫苗和疫苗制品的效力检验，也用于人工育成弱毒株的毒种， 以及微生物学与免疫学、 动物传染病等的研究。其筛选程序为：
①致病力测定。常用易感实验动物， 本动物或鸡胚， 易感细胞测定 MLD（最小致死量）或 TCID50（50%细胞致病变量）。
②抗原性测定。菌 （毒）株的抗原性包含抗原与相应抗体结合发生特异性反应的反应原性和刺激机体及致敏淋巴细胞的免疫原性。反应原性多采用血清学方法测定， 以抗体滴度， 效价表示。免疫原性多采用对免疫动物用定量原强菌毒株种毒液攻击测定， 以保护率表示。无论致病力测定或抗原性测定，均应设对照，否则无效。
③稳定性测定。对适应于在培养基、 鸡胚或易感细胞上增殖培养， 传代菌毒株的毒力 （致病力）和抗原性还要进行稳定性测定， 以证明后代特性不变， 才有使用价值， 并参与筛选择优。
④根据病力和稳定性测定。筛选出毒力强， 抗原性好， 性状稳定的菌毒株， 经增殖后进行冻干保存， 冻干菌种于 4℃保存， 冻干病毒毒种于零下 20℃以下， 可保存多年。

3 弱菌 （毒）种选育
弱菌 （毒）种用于弱毒活疫苗， 部分诊断制品和抗血清的制造， 弱菌 （毒）种的主要特征是致病力极微弱或无致病力，免疫原性优良能使免疫动物获得坚强的免疫力。据此， 就必须从自然界筛选， 或以人工改变野生型强毒株的遗传特性进行培育获得。天然自然弱毒株拟或人工培育弱毒株， 均由于 DNA 上核苷酸碱基顺序的改变，而导致遗传性状突变的结果。获取弱菌毒种的传统方法主要有以下几种：
①利用病原自然弱毒株。某些传染病的病原在自然界中存在着具有免疫原性的自然弱毒株，可以利用于生产活疫苗， 例如鸡新城疫 LaSota 株， D10 弱毒株是从自然鸡群鸭群中分离到的。
②选择同源不同种的微生物种。选择与病原有一定血缘关系， 在分类上同属不同种， 但具有一定交叉免疫原性， 而天然宿主又不相同的微生物株作为疫苗株。如利用火鸡疱疹病毒作为防止鸡马立克氏病毒疫苗株，山羊痘细胞致弱株用于预防绵羊痘和羊接触传染性脓胞皮炎，以及早年兽使用过的以牛病毒性腹泻病毒接种防止猪瘟感染。最为著名的是英国人詹纳以牛痘病毒防止人类天花这个古典而造福人类的尽人皆知的例子， 至今在我国仍然有人把接种痘苗疫苗称之为种 “牛痘” 。
③人工传代致弱。在培养基中， 组织细胞培养中，鸡胚内和非宿主动物体内连续传代减弱病原的致病性， 以之制作活疫苗。至目前为止， 用于预防人类和家畜传染病的活疫苗的菌种和病毒种，大部分都以这种方式培育，在动物传染病的控制与消灭过程中， 这类疫苗起着重要的作用。我国的猪瘟兔化弱毒株是其中最为成功的例子，他是将猪瘟病毒强毒通过兔体传 400 余代后育成的弱毒株，鸭瘟鸡胚化弱毒株通过鸭胚 9 代和鸡胚 23 代后育成的。在我国经过几代专家和兽医工作者的努力，育成了一些弱毒株， 作为疫苗种毒生产疫苗， 在控制和消灭动物疫病中发挥了重要的作用。

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