2014年省某养殖场肉仔鸡大肠杆菌和新城疫病交叉感染治

奚敏江 罗伟 王吉
常州市武进区横林镇畜牧兽医站
扬州大学

    江苏省某养殖场饲养的肉用仔鸡发生以精神沉郁、 食欲减退或废绝、 腹泻、 排黄绿色稀粪及大批死亡为临床特征， 剖检部分鸡以肝周炎、 气囊炎、 肌胃角质层下有点状或片状出血， 腺胃乳头充血出血， 部分肠管有出血， 呼吸道、 气管出血为主要病理变化， 怀疑为大肠杆菌与新城疫病毒的混合感染， 采集病料进行实验室检查， 并根据药敏试验结果选择敏感药物进行对症性治疗。

1材料与方法
1.1试验材料
    对发病肉鸡现场分离细菌， 同时采取肝脏， 脾脏， 肾脏速冻， 以备送实验室检查。庆大霉素、 环丙沙星、 阿米卡星、 青霉素G、 呋喃妥因、 强力霉素、 奈替米星、 氨苄青霉素、 羧苄青霉素、 壮观霉素、 头孢噻肟、 头孢曲松、 硫酸新霉素、 头孢西丁、 萘啶酮酸等购于杭州天和微生物试剂有限公司。硫化氢、山梨醇、木糖、蔗糖、棉子糖、肌醇、水杨苷、蛋白胨、甘露醇、乳糖、葡萄糖发酵用的试管购于上海市医学化验所试剂厂。
    大肠杆菌O因子血清购自中国兽医药品监察所。抗H9亚型禽流感病毒阳性血清、 抗H5亚型禽流感病毒阳性血清、 抗新城疫病毒 （NDV） 阳性血清、 9日龄非免疫鸡胚均由扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室提供。

1.2试验方法
1.2.1细菌分离
取病料接种营养琼脂和麦康凯琼脂培养基平皿， 在37 ℃恒温箱培养24 h。
1.2.2染色镜检
用接种环在4块玻片上分别滴生理盐水， 然后用接种环挑取少量麦康凯琼脂培养基平皿内培养的细菌与玻片上的生理盐水混合， 并均匀涂布于玻片上， 自然干燥。分别进行美兰染色和革兰氏染色。
1.2.3药敏试验
    从麦康凯培养基内挑取单个菌落均匀接种琼脂平皿内， 用无菌小镊子夹取各种药敏纸片， 平贴于琼脂表面， 各距离相等。将贴好药敏试纸片的平皿翻转， 将其倒置放入37 ℃恒温箱培养24 h。平皿从恒温箱内取出后， 观察药敏纸片周围有无菌圈形成，按抑菌圈直径的大小判定各药敏纸片上的敏感度。
1.2.4生化试验
用接种环挑取纯培养的待检菌落接种于各微量发酵管， 倒置37 ℃恒温箱24 h观察结果。
1.2.5大肠杆菌O因子血清凝集试验
将纯培养细菌分别与大肠杆菌因子血清做玻片凝集试验， 鉴定血清型。
1.2.6病毒分离
    以无菌法取病死鸡的肝、 脾、 泄殖腔、 气管等脏器。将病料按1 ∶ 5加入双抗PBS （含庆大霉素与链霉素） 中研磨， 收集研磨液， 反复冻融3次。以7000 r/min离心10 min， 再次用双抗： PBS=1 ∶2稀释， 7 000 r/min离心10 min。按每只0.2 mL将病毒样品接种于鸡胚的尿囊液及尿囊膜， 用石蜡封口，置35~37 ℃恒温箱培养， 24 h内死亡鸡胚弃去， 收集24~96 h死亡鸡胚的尿囊液。
1.2.7血凝抑制 （HI） 试验
按常量规微法进行HI试验。结果判定： 能使4个凝集单位的病毒凝集红细胞的作用完全受到抑制的血清最高稀释倍数， 即为血凝抑制价。
1.2.8鸡胚平均致死亡时间测定
用灭菌生理盐水连续10倍稀释病毒， 取最小致死量10-7稀释度， 每个稀释度接种5个9日龄的非免疫鸡胚， 每个尿囊腔接种0.1 mL。接种后的鸡胚在37 ℃孵育7 d， 每天早晚各照胚一次， 记录每组鸡胚中各个胚死亡的时间， 计算鸡胚平均死亡时间 （MDT） 。

2结果
    细菌分离培养结果在营养琼脂上形成圆形、隆起、 光滑、 湿润、 无色的菌落； 麦康凯琼脂上形成红色菌落； 革兰氏染色镜检结果可见革兰氏阴性，两端钝圆的短杆菌， 符合大肠杆菌的形态特点。生化试验结果表明， 分离的细菌能使木糖、 蔗糖产酸产气， 甘露醇、 乳糖、 葡萄糖产气不产酸， 硫化氢、 棉子糖、 蛋白胨不分解， 山梨醇、 肌醇、 水杨苷产酸不产气。药敏试验结果表明， 分离菌对呋喃妥因和头孢西丁敏感， 但对强力霉素、 庆大霉素等药物有耐药性。O因子血清鉴定显示， 分离的鸡大肠杆菌血清型为O111。
病料接种9日龄非免疫鸡胚后， 于24~96 h内死亡， 鸡胚呈全身出血性病变， 尤其是头部和四肢末端出血严重。取死亡的鸡胚置 4℃过夜 （不超过24 h） 后无菌采集尿囊液， 尿囊液清亮。HI试验结果显示， 该病毒样品既不能被抗H5亚型禽流感病毒阳性血清抑制， 也不能被抗H9亚型禽流感病毒阳性血清抑制， 只能被抗NDV阳性血清抑制， 其HI效价为24。表明从病鸡中分离出的病原为NDV。MDT为36.8 h， 表明该NDV分离株为强毒株。
    根据送检病料的病史和流行病学特点、 病理解剖变化， 初步诊断为大肠杆菌和新城疫病毒混合感染。

3治疗及预防措施
    采用强力霉素 （河南泰利德动物药品公司） 加入排疫肽 （血浆蛋白粉） 拌料服用， 干扰素 （大连三仪动物药品有限公司） 肌注， 每天1次， 连用3 d。头孢内服每天2次， 连用3~5 d。或者丁胺卡那霉素内服， 连用3~5 d， 同时在饲料或者饮水中加入多种维生素和适量葡萄糖和小苏打。并且选用中药如禽菌灵散等作为辅助药物进行饲喂。大肠杆菌是条件性致病菌， 防制大肠杆菌病的关键在于加强饲养管理、 做好各个环节的卫生消毒、消除各种发病诱因。日常要提供全价优质饲料、饲料中添加霉菌毒素吸附剂， 并给以足量维生素和电解质； 夏季还要注意防暑； 可添加饲料添加剂如碳酸氢钠、 杆菌肽锌、 维生素C等； 严格执行卫生防疫措施， 创造一个良好的饲养环境。

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