中药多糖对雏鸡外周血中性粒细胞吞噬力的影响

李星艳 靳录洋 石河子工程技术学校

    鸡易感多种传染病， 如新城疫、 禽流感、 传染性法氏囊炎等， 死亡率高， 且无特效药治疗， 一旦发病就会给养禽业造成巨大的经济损失。目前主要依靠接种疫苗来预防疫病的发生，但由于部分疫苗免疫力不强、 质量不稳定、 免疫保护期短等原因， 常常导致免疫失败； 同时由于病毒变异等多方面原因导致病毒的毒力逐渐增强，给防治带来很大困难[1]。解决这一问题的途径之一就是寻找安全有效的免疫增强剂。
    近年来许多研究发现，中药多糖特别是补益类中药多糖具有增强机体免疫功能的作用，且具有安全、 无毒、 稳定等优点， 对正常细胞没有毒副作用， 是良好的生物反应调节剂。因此， 将中药多糖研制开发为免疫增强剂，对提高疫苗效价并延长免疫期， 减少免疫次数具有实际意义。 但大多数学者只是针对单味多糖如当归多糖[2]、 黄芪多糖[3]、茯苓多糖[4]、 牛膝多糖[5]、 金樱子多糖[6]、 枸杞多糖[7]、或将几种多糖按一定比例组成的复合多糖[8， 9]进行研究，而中药复方多糖作为免疫增强剂的研究还鲜有报道。笔者等从已证实对雏鸡有免疫增强效果的自拟中药复方[10]中提取的复方多糖与黄芪多糖、 当归多糖、 淫羊藿多糖对鸡外周血中性粒细胞吞噬力的影响来探讨中药复方多糖的免疫增强效果， 以期为开发新药提供理论依据。

1材料与方法
1.1药物
中药复方由黄芪、 茯苓、 熟地、 补骨脂、 何首乌等中药组成，各单味中药均购自石河子市医药公司。 复方多糖、 黄芪多糖、 当归多糖、 淫羊藿多糖由石河子大学动物科技学院中兽医实验室提供， 多糖含量分别为 42.82％、 27.35％、 27.73％、 32.30％。试验中注射剂量均指经过换算实际进入雏鸡体内纯多糖的含量。 多糖注射前用蒸馏水溶解， 配成溶液， 115 ℃高压灭菌 30 min， 备用。
1.2试验动物
试验鸡由石河子市廖和荣养鸡场提供，临床检查健康。
1.3主要试剂
甲醇 （西安化学试剂厂） ， AR 级； 姬姆萨染液；白色葡萄球菌液（取白色葡萄球菌在琼脂斜面上24 h 生长的培养物，用无菌生理盐水刮下菌苔，PBS 洗涤 2 次，用比浊法将菌液调整成 2×108个CFU/mL 悬液， 100 ℃加热 15 min 灭活， 4 ℃冰箱保存备用 ） 。
1.4主要仪器
凹玻片、 OLYMPUS-CX21FS1 生物显微镜； 细胞计数板。
1.5方法
1.5.1试验设计
将 260 只 1 日龄健康罗曼雏鸡随机分为 13 组， 每组 20 只。 1 组为对照组， 于 1 日龄开始皮下注射生理盐水， 0.2 mL/只， 连续注射 7 d。2-13 组为不同浓度的中药多糖组， 于 1 日龄开始分别皮下注射浓度为 12.5 mg/mL、 25 mg/mL、 50 mg/mL的黄芪多糖 （APS） 、 当归多糖 （ASP） 、 淫羊藿多糖（EPS） 和复方多糖， 0.2 mL/只， 连续注射 7 d。
1.5.2饲养管理
用购自新疆天康饲料厂的饲料常规饲养， 13 组鸡的饲养方法、 饲养条件、 环境、饲料品质及饲养管理均一致。
1.5.3样品的采集
各组鸡每组随机抽取 10 只，在第 7、 14、 21 天时，心脏采血 1 mL，在第 28、 35、42、 49、 56 天时， 翅静脉采血 1 mL， 柠檬酸钠抗凝。
1.5.4检测方法
取抗凝血 0.3 mL， 滴于凹玻片中， 加入白色葡萄球菌液 0.1 mL， 摇匀， 37 ℃孵育 40 min， 每隔 10 min 振摇 1 次。 培养结束后， 充分摇匀凹玻片内容物， 用毛细管吸取 1 滴， 置载玻片上推成薄片， 甲醇固定后姬姆萨染色， 油镜计数200 个中性粒细胞， 统计吞噬细菌的中性粒细胞数以及每个中性粒细胞吞入的细菌数。 按下式计算：吞噬率＝吞噬细菌的中性粒细胞数200×100％吞噬指数＝200 个中性粒细胞吞噬细菌的总数200
1.6数据处理
数据采用 SPSS13.0 软件统计，以平均数±标准误 （Mean±SE）表示， 显著性分析采用方差分析和多重比较。

2结果与分析
结果见表 1、 2。

表 1 和表 2 表明， 皮下注射多糖后， 各多糖组中性粒细胞的吞噬力均提高，且在试验第 7、 14、21、 28 天有不同程度的提高， 之后逐渐降低。试验第7 天， 与对照组吞噬率和吞噬指数相比， 25 mg/mL 的黄芪多糖、 12.5 mg/mL 和 25 mg/mL 复方多糖组差异极显著（P<0.01） ； 12.5 mg/mL 和 50 mg/mL 的黄芪多糖、 25 mg/mL 的当归多糖和淫羊藿多糖、50 mg/mL 的复方多糖组差异显著 （P<0.05） ； 其余多糖组差异不显著。试验第 14、 21 和 35 天， 与对照组吞噬率和吞噬指数相比， 复方多糖组和黄芪多糖组、 25 mg/mL 的当归多糖组和淫羊藿多糖组差异极显著 （P<0.01 ） ， 其余各多糖组差异显著 （P<0.05 ） 。试验第 28 天，与对照组吞噬率和吞噬指数相比，各多糖组均表现差异极显著 （P<0.01 ） 。 试验第 42 天，与对照组吞噬率和吞噬指数相比， 25 mg/mL 的各多糖组和 12.5 mg/mL 的黄芪多糖、 50 mg/mL 的复方多糖组差异极显著 （P<0.01） ， 其余多糖组差异显著 （P<0.05） 。试验第 49 天， 与对照组吞噬率和吞噬指数相比， 25 mg/mL 的黄芪多糖和当归多糖组、12.5 mg/mL 和 25 mg/mL 的复方多糖组差异极显著（P<0.01） ， 12.5 mg/mL 和 50 mg/mL 的黄芪多糖组、25 mg/mL 的淫羊藿多糖组、 50 mg/mL 的复方多糖组差异显著 （P<0.05） ， 其余多糖组差异不显著。试验第 56 天时，与对照组吞噬率和吞噬指数相比，25 mg/mL 的复方多糖组差异极显著 （P<0.01） ， 黄芪多糖组、 25 mg/mL 的当归多糖和淫羊藿多糖组、12.5 mg/mL 和 50 mg/mL 的复方多糖组差异显著（P<0.05） ， 其余多糖组差异不显著。

3讨论
    机体的宿主防御能力复杂多样，其中包括许多种独特但又功能交错的细胞[12]。 吞噬细胞 （中性粒细胞、 单核细胞和巨噬细胞） 是对病原生物侵入最早做出应答的细胞类型，它们是天然免疫应答的主要参与者[13]。中性粒细胞在血液的非特异性细胞免疫系统中起着十分重要的作用，它处于机体抵御微生物病原体入侵的第一线，当炎症发生时， 它们被趋化性物质吸引到炎症部位， 由于中性粒细胞内含有大量溶酶体酶，能将吞噬入细胞内的细菌和组织碎片分解， 入侵的细菌被包围在一个局部并被消灭， 防止病原微生物在体内扩散。除了在抗感染中发挥重要的防御作用外， 中性粒细胞可引起感染部位的炎症反应并参与寄生虫感染引发的变态反应， 从而引起免疫病理损害。抗体直接作用于组织或细胞上的抗原，中性粒细胞通过其 Fc 受体与靶细胞表面的 IgGFc 段结合，发挥 ADCC 作用，从而导致细胞毒型变态反应损害； 当抗原抗体比例适合而形成 19 S 大小的免疫复合物， 不易被吞噬， 沉积于毛细血管壁， 激活补体， 吸引中性粒细胞至局部。 中性粒细胞通过 Fc 受体和 C3b受体与免疫复合物结合并吞噬之。吞噬过程中脱颗粒， 释放出一系列溶酶体酶类， 造成血管和周围组织的损伤；在 IgE 介导的速发型变态反应的部位也有中性粒细胞的聚集，说明中性粒细胞也参与了速发型变态反应导致的病理损害。本试验表明，皮下注射中药复方多糖、 APS、ASP、 EPS 后，可提高中性粒细胞吞噬率和吞噬指数。 说明中药多糖可以提高中性粒细胞的吞噬力，从而增强机体的免疫力。

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