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江秀芳 江苏省大丰市万盈镇畜牧兽医站
徐淮白山羊是江苏地区的主导品种，主要分布在江苏北部的徐州地区。2013 年 4 月开始偿试在本地养殖户中开展胚胎移植工作。供受体羊均为徐淮白山羊，共移植 56只，获得了 43%的移植妊娠率。由于农村养殖户每户养殖数量较少且分散，这给开展胚胎移植工作带来一定困难。为此，我们采取了一些措施，如分户饲养与集体饲养相结合。先分散在各户饲养，再在同期发情处理的第 15 天将所要接受移植的羊全部结合到一块进行集中饲养，集中饲养时间为 8 ～10 d。
1受体、供体的选择及管理
1. 1受体羊的选择及饲养管理
受体选择: 选择繁殖机能正常，无传染性疾病、健康状况良好、膘情适中的 2 ～ 6岁经产羊，或羔羊断奶 1 月以上的母羊作受体。移植前 2 个月进行定期驱虫，以利于抓膘，提高同期发情率及受胎率。饲养管理(短期优饲): 在移植前加强饲养管理，达到中等膘情，不能过肥或过瘦。从同期发情放栓之日起要适当增加豆类饲料和萝卜等多汁饲料的供应。
1. 2供体羊的选择及饲养管理供体选择: 供体一般为经产 2 ～ 5 胎的母羊，要求身体健康状况良好、生殖器官正常，有正常繁殖史、繁殖力较高、遗传性能稳定、生产性能优良，羔羊断奶 1 个月以上，未孕。
饲养管理: 进行常规传染病和寄生虫病的防治。饲养管理遵循一般繁殖羊群的原则，保持羊群体况适度，根据羊群营养状况适时调整日粮标准，增加蛋白质、能量饲料补充料，并注意矿物质和维生素的供应。用促卵泡素(宁波三生药业)，以减量法进行供体超排处理。用阴道栓配合促性腺激素，或用氯前列烯醇进行受体同期发情处理。
2胚胎回收及检查
2. 1冲胚
在授精后 68 ～72 h 进行手术冲胚。采用输卵管冲胚法可获 2 ～ 8 细胞期的胚胎及少量的 16 细胞期胚胎，用于鲜胚移植。首先，对供体羊全身麻醉，术部消毒，采取前低后高半仰姿势将其保定在手术台上。在腹底部偏右侧距乳房基部 3 ～4 cm 处做一长 4 ～5 cm 的纵向切口，逐层切开。切开腹膜后，将中指和食指伸入腹腔，在骨盆腔前沿膀胱之下触摸子宫角，把子宫角牵引到切口之外，再把卵巢引出，检查黄体发育情况，如果黄体发育正常，即冲胚。冲胚时，在输卵管伞部前端插入一个带有胶管的回收圆针，并用手卡住，准备收集冲出的胚胎; 再向输卵管的壶腹部处，插入装有冲胚液的进液针头，缓慢推入冲胚液，将胚胎冲入器皿中，冲胚液 30 ～ 50 mL。一侧冲洗结束时，除去器械，检查针孔，确认无出血现象，将输卵管送回腹腔内，然后按相同办法进行另一侧冲胚。两侧冲洗完毕后，将子宫送回腹腔，并向腹腔内注入 25 ～ 30 ℃ 生理盐水，最后逐层进行缝合。
2. 2胚胎检查
检卵: 将收集的冲卵液于 37 ℃ 温箱内静置 10 ～ 15 min。胚胎沉底后，移去上层液。取底部少量液体移至平皿内，静置后，在体视显微镜下先在低倍(10 ～ 20 倍)下检查胚胎数量，然后在较大倍数(50 ～100 倍)下观察胚胎质量。胚胎质量鉴定: 正常发育的胚胎，其中卵裂球外形整齐，大小一致，分布均匀，外膜完整。无卵裂现象(未受精)和异常卵(外膜破裂、卵裂球破裂等)都不能用于移植。胚胎保存: 用吸卵管吸取发育成熟的胚胎，放入 PBS 培养液中保存，在 24 ～ 26 ℃下，保存时间不超过 4 ～5 h。
3受体羊胚胎移植
实行全身麻醉，术部消毒。采取前低后高半仰姿势将受体羊保定在手术台上，在腹底部偏右侧距乳房基部 3 ～4 cm 处做一个长4 ～5 cm 的纵向切口，逐层切开。切开腹膜后，引出子宫、输卵管以及卵巢，检查黄体(无黄体或黄体过小的受体羊不能移植)。若有妊娠黄体，且生殖系统无炎症，即作为受体羊。将受体羊黄体一侧的输卵管伞部拔开，用装入胚胎的注射器从此处插入 3 ～4 cm，将胚胎注入输卵管内。移植结束后，把子宫角送入腹腔，在创口洒上抗生素，防止感染，按手术要求缝合好腹壁创口。
4术后护理
4. 1供体术后护理及配种
胚胎回收手术后注意伤口护理，有问题及时处理。对季节性繁殖的品种，为了不影响其自然繁殖及次年羔羊管理，当年只进行一次超排，在下次发情时配种，自然繁殖。
4. 2受体术后护理与妊娠、分娩应加强术后护理、观察，对妊娠受体适当增加日粮营养，以满足妊娠需要。妊娠后期更应加强管理，防止流产，并做好接产和羔羊护理工作。
5存在的问题
5. 1超排效果不理想
对于江苏大丰地区来说，最佳的移植时间一般是在 8 月下旬至 11 月上旬，由于参加胚胎移植的人员中有几个是教师，所以移植只好安排于暑假期间，但是略有些早，影响供体的超排效果。超排效果不够稳定。利用外源性促性腺激素刺激多排卵并不能每次都得到预期效果，不同的个体对超排处理的反应差异极大，排卵率很不稳定，有的个体甚至对超排处理毫无反应或排卵数很少，也有的个体经超排处理后卵巢上虽有大量卵泡发育，但无排卵发生。
5. 2胚胎回收率低
位于输卵管或子宫角内的胚胎并不能够全部回收，而且排卵数过多往往会降低胚胎的回收率，其原因可能是卵巢体积太大(超排处理的结果)，排出的卵子未能进入输卵管伞而丢失。
5. 3管理细节不到位影响效果
当地养殖户意识比较差，不懂这方面的知识，有几家养殖户在输精前一天的晚上偷着利用种公羊与自家不进行胚胎移植的发情母羊配种，以至第二天所采精液品质下降，造成供体羊受精率降低，出现了很多未受精卵。考虑到养殖户工作忙等问题，在刚移植完就让其各自把羊拉回去或赶回去，我认为路程稍微远的应该过几天运输或赶。否则造成术部损伤不利于愈合或造成早期流产等。
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